树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究.pptx

研究背景北大医院感染科张恒辉树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第1页

HBV慢性感染主要原因HBV特异细胞免疫功效低下T细胞树突状细胞（DC）慢性乙型肝炎患者DC成熟、功效异常研究背景（1）特异性CTL数量少低反应树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第2页

HBV慢性感染主要原因HBV特异细胞免疫功效低下T细胞树突状细胞（DC）慢性乙型肝炎患者DC成熟、功效异常促进DC成熟、恢复DC功效增强DC激活特异性抗病毒免疫反应打破免疫耐受彻底去除病毒研究背景（1）特异性CTL数量少低反应取得高频数、功效强HBV特异性CTL树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第3页

促进DC成熟，增强DC功效CpGCD40LAd-IL-12转染Poly（I：C）关于恢复DC功效研究研究背景（2）树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第4页

研究目标本研究经过在体外进行慢性乙型肝炎患者单核细胞DC方向转化，并辅以聚肌胞Poly(I:C)刺激，增强DC成熟和功效。将患者DC经HBVcore18-27肽负载后，刺激病人本身T淋巴细胞。并用Elispot法及本研究室构建HLA-A2肽四聚体复合物检测病毒特异性T淋巴细胞数量和功效。树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第5页

研究对象和方法北大医院感染科张恒辉树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第6页

研究对象22例HLA-A2+慢性乙型肝炎患者。HBeAg+患者16例、HBeAb+患者6例。HBVDNA均≥104copy/ml。排除HCV、HAV、HDV、HEV感染。近六个月没有接收过抗病毒治疗。树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第7页

研究方法HLA-A2型别判定DC体外培养扩增及判定以树突状细胞为抗原递呈细胞体外诱导病毒抗原特异性T细胞Elispot检测分泌IFN-γT细胞频数MHC-肽四聚体检测HBVcore18-27肽特异性CD8+T细胞树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第8页

HLA-A*02型别判定外周血淋巴细胞标识鼠抗人HLA-A02单抗；流式细胞仪检测；每份标本均设本身阴性对照。树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第9页

树突状细胞体外培养扩增及判定分离病人PBMC；GM-CSF、IL-4刺激下DC培养转化；Poly(?I:C)刺激；经过流式细胞仪检测DCHLA-DR、CD80、CD86、CD83、CD14等表面分子表示，进行功效及成熟度判定。树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第10页

以DC为抗原递呈细胞体外诱导HBV抗原特异性T细胞培养成熟DC负载HBV关键肽（HBVcore18-27FLPSDFFPSV）；DC与自体T细胞共培养48-72h；单纯IL-2维持未经本身树突状细胞刺激T细胞组为对照。树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第11页

Elispot检测分泌IFN-γT细胞频数封闭种板孵育：37℃，5%CO2孵育15-20h；显色计数：CTLIMMUNOSPOT分析仪计数，取两复孔平均值树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第12页

MHC-肽四聚体检测HBVcore18-27肽特异性CD8+T细胞PE-HLA-A0201/HBVcore18-27tetramer和FITC-鼠抗人CD8标识；流式细胞仪检测；慢性乙型肝炎患者，采取HLA-0201/HCV四聚体标识作为阴性对照；树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第13页

统计学处理试验数据以?x±SD表示。用SPSS10.0软件进行统计分析，组间比较用配伍组方差分析。树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第14页

结果北大医院感染科张恒辉树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第15页

DC扩增、表型判定及Poly(I:C)对其表面分子表示影响组别例数HLA-DR+CD80+CD83+CD86+CD14+CD11c+未加Poly(I:C)组2283.6±6.923.4±6.619.3±2.284.2±6.38.4±2.895.5±3.1Poly(I:C)作用组2288.8±7.839.3±8.6*30.7±5.6*85.4±3.23.7±2.3*93.4±2.9慢性乙型肝炎病人DC经Poly(I:C)作用前后表面分子表示比较*表示差异有统计学意义（P0.01）树突状细胞体外刺激对HBV特异性细胞毒T细胞影响的研究第16页