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免疫学实验整理
一、凝集试验、吞噬试验
(一)凝集试验
1、直接凝集反应(ABO血型鉴定)
2、间接凝集反应(类风湿因子测定)
3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验
(二)吞噬试验(示教)
1、中性粒细胞的吞噬作用(小吞噬)
2、巨噬细胞的吞噬作用(大吞噬)
名解:
1.免疫学检测技术:利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子(抗体、补体、细胞因子和粘附
分子等)及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。如凝集反应可用于检测抗原抗体,吞噬
十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应(agglutinationreaction):在一定浓度的电解质溶液中,颗粒性抗原与相应抗体结
合后,出现肉眼可见的凝集块,称为凝集反应。
3.直接凝集反应(directagglutinationreaction):细菌、细胞等颗粒性抗原,在适当电解质参
与下可直接与相应抗体结合出现凝集,称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应(indirectagglutinationreaction):将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的
颗粒性载体表面(这种载体与免疫无关),然后与相应抗体或抗原结合,在适量的电解质存
在下,出现特异性凝集现象,称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验(coagglutination):利用金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)能与人和多种哺乳
动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性,将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡
萄球菌上,与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度(titer)、效价:Themaximumdilutionthatgivesobviouslyvisibleagglutination(++)iscalled
thetiter.
实验及注意点:
1、检测抗原抗体的基本原则:根据抗原抗体结合反应的高度特异性,用已知抗体(抗原)
检测未知抗原(抗体),有现象则说明有相应抗原,无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应(ABO血型鉴定):若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原,为A型血。
凝集时红细胞凝集成块。
3、间接凝集反应(类风湿因子测定):人丙种球蛋白吸附在红细胞上成为致敏红细胞,再
用致敏红细胞检测类风湿关节炎患者血清中的类风湿因子(抗变性IgG抗体)。此实验
中以“++”的血清最高稀释度作为试验效价,效价1:40则阳性。
4、金黄色葡萄球菌协同凝集试验:
123
致敏金葡菌+脑脊液致敏金葡菌+生理盐水未致敏金葡菌+脑脊液
凝集(脑脊液中A群脑膜炎球菌阳性)不凝集不凝集
5、中性粒细胞的吞噬作用(小吞噬);巨噬细胞的吞噬作用(大吞噬)
6、吞噬百分率=(吞噬的中性粒细胞数)/(观察记录的中性粒总数(100))×100%
7、吞噬指数=(被吞噬的细菌总数)/(观察记录的吞噬细胞总数(100))【书上和老师课
件上有出入,此为书上版】
二、沉淀试验、溶血反应
(一)沉淀反应
1、单向琼脂扩散试验(示教)
2、双向琼脂扩散试验
3、对流免疫电泳试验
(二)补体参与的免疫反应
1、溶血反应
2、补体结合试验(原理)
名解:
1.沉淀反应(precipitation):可溶性抗原如血清、毒素、细菌浸出液等与相应抗体结合,当
两者比例合适、并有适量电解质存在时,形成肉眼可见的沉淀物或沉淀线,称为沉淀反应。
单项琼脂扩散实验(未做):定量实验。将一定量抗体和琼脂混合倾注于玻璃板上,凝固后
在琼脂层中打孔,再将抗原加入孔中。孔中抗原向四周扩散,在抗原与抗体比例合适处呈现
白色沉淀环,沉淀环直径大小与抗原浓度成正比。
2.双向琼脂扩散实验:定性或半定量实验。将可溶性抗原和抗体分别加入到琼脂板相对应的
孔中,两者各自向四周扩散,如果抗原与抗体相对应,则在两者比例合适处形成白色沉淀线。
根据沉淀线位置、形状等可对抗原或抗体做出定性分析。
3.对流免疫电泳:蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷,在电泳时从负极向正极移动。抗体
在
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