第13章 基因治疗.pptxVIP

第十三章基因治疗制品;一、基因治疗简介;;2.基因治疗的策略;一、基因治疗简介;又称间接体内基因转移，基本途径是：

个体供者?组织或细胞移植物?组织培养

治疗基因或标记基因?培养细胞

选择或富集转基因细胞

转染细胞?实验动物或受试病人的靶器官?;一、基因治疗简介;又称直接体内基因转移，将插入目的基因的表达载体直接导入体内的方法。基本途径是：

含治疗基因表达载体直接注射/与介质结合后直接注射或用基因枪导入体内

包装细胞系中包装好的复制缺陷型病毒颗粒

优点：简便省时省力，能很快观察到外源基因的表达及作用

缺点：DNA在体内不易进入细胞，易被降解，以病毒颗粒的形式导入人体则易引起免疫反应和被补体灭活。;1．体细胞基因治疗：把外源基因导入患者的体细胞，以治疗或预防基因接纳者个人的疾病，只有特定的个体受益，但不能遗传给后代。

2．种系细胞的基因治疗：在生殖细胞（精子、卵子或未分化的受精卵）中引入正常基因或修复缺陷基因以校正遗传缺陷。引入的外源基因（整合到基因组）能遗传给后代。

优点：目的基因转移到机体的所有组织并遗传给后代。

目前尚未开展，一是涉及伦理学问题；二是技术困难（诊断困难、引起新的插入突变的危险）;二、基因治疗制品的概念及其发展;一、生物载体;1．病毒载体;充分了解载体病毒的基因组结构和功能（编码区/非编码区、结构蛋白/非结构蛋白、必须基因/非必须基因、包装容量等）

外源基因插入病毒基因组的非必须区

致病基因（裂解细胞、癌基因使细胞转化）?删除

插入外源基因长度受限?删除非必须基因/必须基因（由辅助病毒或宿主细胞提供该基因的功能）;◆反转录病毒（Retrovirus,RV）载体;优点：

安全，不整合到染色体上

不需要宿主细胞的分裂增殖就能进入细胞

稳定，腺病毒不易突变，且容易大量制备并纯化。

给药途径广；表达效率高。

缺点：

致缺乏靶向性

不能整合到宿主细胞基因组使得外源基因表达持续时间有限

插入外源DNA的能力也有限（≤7kb）。?;◆腺相关病毒(AAV)载体;◆慢毒(LV)载体;优点：

嗜神经组织

能插入较长外源基因（20kb或略长些）

??点：

较大的基因组使得遗传操作较难进行

不整合到宿主细胞基因组，表达持续的时间受限

包含大量功能基因，安全水平尚待进一步观察;?优点：

安全，痘病毒在人类历史上已经广泛应用

外源基因的容量可达30kb

适用广泛的细胞型（可感染非分裂的细胞）

缺点：

不整合入细胞基因组，故外源基因表达的时间不能持久

载体过大，受免疫系统的影响也较大。;第二节基因递送载体;2.非病毒载体;裸DNA;脂质体/DNA复合物;阳离子多聚体

DNA带负电

细胞表面带负电;4.其它方法;受体介导基因转移技术

磷酸钙共沉淀法

电穿孔法

显微注射法;第三节体内基因治疗制品;1．反义寡核苷酸药物（ASON）

人工合成的、长度为13～25个碱基的寡核苷酸（DNA或RNA）及其类似物。

（1）ASON的作用机制

①诱导核酸酶（RNaseH）对靶mRNA的降解。

②校正靶pre-mRNA的剪接。;1．反义寡核苷酸药物（ASON）

（2）ASON的修饰

一定的稳定性

较好的细胞通透性

必须含有13个以上的碱基

准确到达靶部位;第一代：硫代磷酸酯寡脱氧核苷酸（PS-ODN）;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第三节体内基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;第四节体外基因治疗制品;;治疗更精准。由于CAR-T细胞是应用基因修饰病人自体的T细胞，利用抗原抗体结合的机制，能克服肿瘤细胞通过下调MHC分子表达以及降低抗原递呈等免疫逃逸，让肿瘤细胞无所逃遁；

多靶向更精准。CAR既可以利用肿瘤蛋白质抗原，又可利用糖脂类非蛋白质抗原，扩大