遗传的分子基础.ppt

基因库构建与目的基因分离基因库(基因文库)：包含特定基因组所有基因、DNA区段的全部分子克隆的集合体。根据分子克隆中所含核酸片段的类型，基因库可分为：核基因库、染色体库、cDNA库和线粒体库等。第117页,共125页，星期六，2024年，5月(二)、转基因受体转基因受体的种类和特性对目的基因导入、导入后筛选、受体的再生等都有很大的影响。植物基因工程常用受体包括：组织、器官、悬浮培养细胞、未成熟胚、合子以及原生质体等。可分别通过器官发生、胚状体或直接发育而获得转基因植株。第118页,共125页，星期六，2024年，5月(三)、目的基因导入受体将目的基因导入受体，并整合到受体染色体上是基因工程目标实现的关键环节。在基因工程研究领域的人们倾向于把所有将外源基因导入受体的过程称为转化(transforming)，将接受外源基因并整合到染色体上的细胞、个体称为转化体/转化子(transformant或transgenic~)。最常用转化方法是：载体导入；理化方法导入(微注射、基因枪、电穿孔法、化学法)；第119页,共125页，星期六，2024年，5月1.载体法导入外源基因载体法——将目的基因连接到特定的载体(转化载体)上，利用载体进入细胞并整合到受体染色体上的能力实现外源基因转化。Ti质粒及其衍生载体是最常用的植物基因工程转化载体，具有导入外源基因并整合到染色体上的能力。将目的基因与载体连接的过程就是重组DNA分子构建的过程(如前述)。将含有转化载体(重组DNA分子)的根癌农杆菌与受体共培养就可以实现转化。第120页,共125页，星期六，2024年，5月2.理化方法导入外源基因理化方法是采用物理、化学方法使受体细胞膜产生局部破损或缺陷，被动吸纳外源DNA片段。(1).微注射/显微注射。在显微镜下用注射器将DNA片段注入受体细胞(动物受精卵)。针头是?0.5-10μm尖头玻璃管。(2).基因枪。将DNA片段(载体?)包在钨或金微粒表面(?1-3μm)，用静电或火药爆炸等驱动微粒射入受体。(3).电穿孔法。将受体细胞置于脉冲电场中，可以使细胞膜产生短暂的(?30nm)左右的微孔，吸收DNA片段。(4).化学法。许多化学物质，如PEG(聚乙二醇)可以刺激原生质体产生吸收DNA片段。常用PEG与电穿孔法结合，提高外源DNA的吸收率。第121页,共125页，星期六，2024年，5月第122页,共125页，星期六，2024年，5月(四)、转化体的筛选与鉴定转化体筛选：根据转基因技术设计进行，如：载体上带有特异性状标记，特别是某种抗生素抗性等。转化体鉴定有两个层次：目的基因是否进入受体(可以是大肠杆菌、酵母、植物或动物)，得到转化体。

即在DNA水平进行筛选与鉴定，常用方法有：限制性酶谱分析、核酸分子杂交、核酸序列测定、序列分析、RFLP等一切可鉴定特定DNA片段的方法。目的基因是否能够正常表达。

包括性状表现、蛋白质产物鉴定。第123页,共125页，星期六，2024年，5月第124页,共125页，星期六，2024年，5月感谢大家观看第125页,共125页，星期六，2024年，5月基因共性（按照经典遗传学关于基因的概念）：基因具有染色体的主要特性：自我复制和相对稳定性，在分裂时有规律地进行分配。交换单位：基因间能重组，而且是交换的最小单位。突变单位：一个基因能突变为另一个基因。功能单位：控制有机体的性状。经典遗传学认为：基因是一个最小的单位，不能分割；既是结构单位，又是功能单位。第85页,共125页，星期六，2024年，5月二、现代遗传学关于基因的概念(一)、现代基因概念基因是DNA分子上带有遗传信息的特定核苷酸序列区段。基因由重组子、突变子序列构成的。重组子是DNA重组的最小可交换单位；突变子是产生突变的最小单位；重组子和突变子都可以是一个核苷酸对或碱基对(bp)。基因可以包含多个功能单位(顺反子)。第86页,共125页，星期六，2024年，5月①突变子(muton)：性状突变时产生突变的最小单位。一个突变子可以小到只有一个碱基对；如移码突变。②重组子(recon)：性状重组时，可交换的最小单位。一个交换子可以只包含一个碱基对。③顺反子(cistron)：表示一个作用的单位，基本符合通常所述基因的大小或略小。所包括的一段DNA与一个多肽链合成相对应；平均为500~1500个碱基对。第87页,共125页，星期六，2024年，5月三、分子遗传学对基因概念的新发展⑴．结构基因(structuralgene)：指可编码RNA或蛋白质的一段D