- 1、本文档共34页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
1.助消化酶2.消炎酶3.防治冠心病用酶4.止血酶和抗血栓酶5.抗肿瘤酶类6.其他酶类药物二、酶在治疗上的应用第32页,共34页,星期六,2024年,5月固定化酶:借助于理化方法把酶束缚在一定空间内并仍具有催化活性的酶制剂。固定化酶的优点:稳定性提高,可反复使用,有一定机械强度可连续化自动化,极易和产物分离等。固定化酶的制备方法:吸附、共价结合、交联、包埋固定化酶在医药上的应用:生产、分离(亲和层析)、医疗:如人工肾(微胶囊的脲酶和微胶囊的离子交换树脂)三、固定化酶及其在医药上的应用第33页,共34页,星期六,2024年,5月感谢大家观看第34页,共34页,星期六,2024年,5月关于酶的分离和提纯等上两次课的内容第一节酶是生物催化剂第二节酶的结构与功能第三节酶的作用机制第四节酶促反应动力学本次课的内容第五节酶的分离、提纯和活性测定第六节重要的酶类第七节酶在医学上的应用第五章酶第2页,共34页,星期六,2024年,5月第五节酶的分离、提纯和活性测定Section5theseparation,purificationandmeasurationofactivityofenzyme第3页,共34页,星期六,2024年,5月
一、酶的分离提纯目的:研究酶的理化性质。包括结构与功能、生物学作用。作为生化试剂及用作药物的酶要求纯度高第4页,共34页,星期六,2024年,5月根据酶在体内作用部位胞外酶---易分离胞内酶---须破碎cell分离提纯的原则选择酶含量丰富的材料目前多采用微生物发酵的方法来获取大量的酶制剂避免蛋白质变性:避免强酸、强碱,低温每一步骤,都要测定酶的总活力和比活力第5页,共34页,星期六,2024年,5月a.选材动物、植物、微生物:含酶量高,易分离的酶分离提纯的步骤选材-破碎细胞-抽提-纯化-保存第6页,共34页,星期六,2024年,5月b.破碎细胞
动物细菌植物
研磨超声波纤维素酶
匀浆溶菌酶
捣碎机化学溶剂(甲苯)
提取液c.抽提抽提条件的选取应根据酶的溶解度和稳定性等。(用稀盐、稀酸、稀碱溶液抽提)盐:一般用等渗盐溶液,如0.05mol/L的PBS,0.15mol/L的NaCl等;T:一般在0~4℃;pH在其稳定范围内且远离其等电点。第7页,共34页,星期六,2024年,5月操作要求:
A.尽量减少酶活性的损失
B.低温0~5℃摄氏度
有机溶剂:-15~-20℃摄氏度
C.抽提液加入EDTA(络合金属)
D.抽提液加入巯基乙醇(防止-SH氧化失活)
E.不能过度搅拌,以免产生大量泡沫,使酶变性
F.测定酶的比活力第8页,共34页,星期六,2024年,5月d.纯化小分子能自然去除,大分子中核酸用鱼精蛋白或MnCl2沉淀去除,粘多糖用醋酸铅去除。而主要工作则是去除杂蛋白。纯化方法与蛋白质基本相同,此外常用选择性变性法如选择性热变性法(某些酶耐热).第9页,共34页,星期六,2024年,5月纯化方法选择性变性法盐析法有机溶剂沉淀法等电点沉淀方法吸附分离方法几种方法配合使用第10页,共34页,星期六,2024年,5月提纯的目的:含量+纯度工艺的选择应权衡含量与纯度,根据酶的应用目的和经济效益取得一个平衡点.每一步都要测定酶的纯度(比活力)并计算纯化倍数和产率以决定该步骤的效益和取舍.酶的比活力(纯度)=活力单位数/毫克蛋白纯化倍数=每次比活力/第一次比活力产率=(每次总活力/第一次总活力)×100%第11页,共34页,星期六,2024年,5月e.保存
将酶制品浓缩,结晶,以便保存(-20℃)
注意:酶易失活,不可烘干。
可用的方法:
(1)保存浓缩的酶液:(2)浓缩液加入等体积甘油-20℃长期保存第12页,共34页,星期六,2024年,5月二、酶的活力测定(定量)酶的活力:又称为酶活性,一般把酶催化一定化学反应的能力称为酶活力,酶的活力大小可用在一定条件下它所催化的某一化学反应的速度来表示,即可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的生成量来表示.一般采用高底物浓度[S]≥100Km(零级反应)测定初速度来定量酶浓度.第1
您可能关注的文档
- 谈读书公开课.ppt
- 非小细胞肺癌进展.ppt
- 镁合金的成分组织和性能.ppt
- 静脉输液营养液的稳定性影响因素.ppt
- 霍乱防治及肠道传染病监测.ppt
- 远离烟草健康生活创建无烟校园.ppt
- 试验设计方法.ppt
- 镇静催眠药中毒.ppt
- 遗传信息的传递.ppt
- 运筹学 对偶问题概念转换方法.ppt
- 浙江省临海市白云高级中学2025届高三历史3月月考试题.doc
- 云南拾谷县第一中学2024_2025学年高二物理上学期10月月考试题.doc
- 2025版高考生物总复习第13讲基因的分离定律教案苏教版.doc
- 湖北省黄石实验高中2024_2025学年高一历史下学期期末考试模拟卷.doc
- 通史版2025版高考历史大一轮复习专题七近代化的曲折发展__中日甲午战争至五四运动前4第4讲从维新思想到新文化运动课后达标检测含解析新人教版.doc
- 2024年高考数学考试大纲解读专题04导数及其应用含解析文.doc
- 河南省许汝平九校联盟2024_2025学年高一语文上学期期末考试试题扫描版无答案.doc
- 江西省吉安市吉水县第二中学2024_2025学年高一历史上学期第二次月考试题.doc
- 北京市平谷区2025届高三政治一模考试试题含解析.doc
- 2025届中考物理第四讲物态变化专项复习测试无答案新人教版.docx
文档评论(0)