发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立.pptxVIP

发酵乳中沙门氏菌依赖解旋酶恒温基因扩增快速检测方法的建立汇报人：2024-01-24

CONTENTS引言发酵乳中沙门氏菌概述依赖解旋酶恒温基因扩增技术快速检测方法的建立实验结果与分析方法评估与应用前景结论与展望

引言01

发酵乳是一种广泛消费的乳制品，其安全性备受关注。沙门氏菌是一种常见的食品污染源，可引起严重的食物中毒。快速、准确地检测发酵乳中的沙门氏菌对于保障食品安全具有重要意义。背景与意义

传统检测方法耗时、操作繁琐、灵敏度不高。分子生物学方法PCR、LAMP等，具有快速、灵敏度高、特异性强的优点，但操作复杂、成本高。恒温基因扩增技术近年来发展起来的一种快速检测技术，具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点，已应用于多种病原体的检测。国内外研究现状

建立一种快速、灵敏、特异的发酵乳中沙门氏菌检测方法。为发酵乳的生产和监管提供技术支持，保障食品安全。促进恒温基因扩增技术在食品安全领域的应用和发展。研究目的和意义

发酵乳中沙门氏菌概述02

0102发酵乳概述发酵乳在市场上广受欢迎，品种繁多，包括酸奶、酸乳酪、酸豆奶等。发酵乳是一种通过乳酸菌发酵制成的乳制品，具有丰富的营养物质和益生菌，有助于改善肠道菌群平衡。

沙门氏菌概述沙门氏菌是一种革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科，广泛存在于自然界和动物肠道内。沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌，可引起食物中毒、急性胃肠炎等疾病，严重时可导致死亡。

发酵乳中的沙门氏菌会对人体健康造成严重危害，如引起腹泻、呕吐、发热等症状，甚至可能导致脱水、休克等严重后果。沙门氏菌在发酵乳中的存在还会对发酵乳产业造成经济损失，影响产品品质和市场信誉。由于发酵乳通常不经过高温处理，因此可能存在沙门氏菌等病原菌污染的风险，需要加强生产过程中的卫生管理和质量控制。发酵乳中沙门氏菌的危害

依赖解旋酶恒温基因扩增技术03

该技术利用特定的解旋酶，在恒温条件下解开双链DNA，使得单链DNA模板得以暴露。依赖解旋酶的作用引物与模板的结合DNA聚合酶的延伸循环扩增设计特定的引物，与暴露的单链DNA模板结合，形成局部双链结构。在恒温条件下，利用DNA聚合酶将引物沿着模板延伸，合成新的DNA链。新合成的DNA链再次成为模板，进行下一轮的扩增，实现指数级的DNA扩增。依赖解旋酶恒温基因扩增技术原理

该技术无需温度变化，即可实现DNA的扩增，简化了实验操作。通过设计特定的引物和解旋酶，可以实现对目标基因的高特异性扩增。该技术对目标基因的扩增效率高，可以实现低浓度样本的检测。由于无需温度变化，该技术可以实现快速检测，缩短了检测时间。恒温扩增高特异性高灵敏度快速检测依赖解旋酶恒温基因扩增技术优点

该技术可用于病原微生物的快速检测，如沙门氏菌、大肠杆菌等。通过设计特定的引物和解旋酶，该技术可用于基因突变的分析和检测。该技术可用于基因表达水平的研究，如mRNA的定量分析等。该技术可用于临床样本中病原体的快速检测和诊断，如血液、尿液等样本的检测。病原微生物检测基因突变分析基因表达研究临床诊断依赖解旋酶恒温基因扩增技术应用

快速检测方法的建立04

对样品进行均质化处理，以消除样品不均匀性对后续检测的影响。将处理后的样品按照一定比例进行稀释，以便于后续DNA提取和扩增反应。采集具有代表性的发酵乳样品，确保样品的新鲜度和保存条件。样本采集与处理

123选择合适的DNA提取方法，如酚-氯仿法、试剂盒法等，从发酵乳样品中提取出DNA。对提取的DNA进行纯化处理，去除蛋白质、多糖等杂质，以避免对后续扩增反应的干扰。对纯化后的DNA进行浓度和纯度检测，确保DNA的质量和数量满足后续实验要求。DNA提取与纯化

依赖解旋酶恒温基因扩增反应01设计针对沙门氏菌的特异性引物，确保引物的特异性和灵敏度。02选择合适的依赖解旋酶恒温基因扩增方法，如LAMP、RPA等，进行扩增反应。优化扩增反应条件，如反应温度、时间、引物浓度等，以提高扩增效率和特异性。03

03结合统计学方法，对实验结果进行统计分析和评估，确定检测方法的准确性、灵敏度和特异性等指标。01对扩增产物进行可视化检测，如荧光检测、比色检测等，以便于快速判断结果。02根据扩增产物的特征，如荧光信号强度、颜色变化等，对结果进行定性和定量分析。结果分析与判定

实验结果与分析05

收集不同来源的发酵乳样品，包括市售产品、自制样品等。实验材料采用依赖解旋酶恒温基因扩增技术（Helicase-DependentAmplification，HDA），针对沙门氏菌特异性基因序列设计引物，进行快速检测。同时，设立传统PCR方法为对照。实验方法实验材料与方法

HDA方法检测结果01在发酵乳样品中，成功检测出沙门氏菌的存在，且检测时间较传统PCR方法缩短。传统PCR方法检测结果02与HDA方法相比，传统PCR方法也能检测出沙门氏