6-酶免疫试验完整版.ppt

2下列哪种反应类型检测时易出现“钩状效应（hookeffect）”,导致结果假阴性（）A．间接法B．双位点一步法C．双抗原夹心法D．竞争法E．捕获法3在双位点ELISA实验时，造成抗原测值低于实际含量的常见原因是（）固相抗体过多反应时间不够标记抗体过多待测物过浓酶的活性过高4ELISA板包被后，最常用的封闭剂是（）A.人血清球蛋白B.牛血清球蛋白C.人血清白蛋白D.牛血清白蛋白E.磷酸盐吐温缓冲液5在ELISA定性测定中，哪种方法类型S/CO＜1结果判断为阳性反应()A．间接法B．双抗原夹心法C．竞争法D．捕获法E．双抗体夹心法6与双抗体夹心法相比，ELISA间接法的主要优点是（）有较大的放大作用减少了操作步骤减少了冲洗次数可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体缩短反应时间7捕获法主要用于何种物质的测定：

A.IgMB.IgGC.IgAD.IgDE.IgE8HRP催化的反应式为DH2+H2O2=D+2H2O,何者习惯上被称为底物：

A.DH2B.H2O2C.DD.H2OE.AP9下列关于ELISA原理的叙述中,哪项不正确：

A.抗原或抗体结合到固相载体的表面并保持免疫活性

B.抗原或抗体与酶结合后仍保持免疫活性和酶活性

C.酶标记物与相应抗原或抗体反应后,使相应底物产生有色物质

D.颜色反应的深浅与抗原或抗体的量成反比

E.反应终止时,待测物的量与酶结合物的量成一定比例10反应结束时，阴性对照管的呈色最强，此情况常见于A.双抗体夹心法ELISAB.竞争法ELISAC.间接法ELISAD.捕获法ELISAE.双抗原夹心法ELISA11ELISA技术中，最常用来检测抗原的方法是（）双抗体夹心法竞争法捕获法间接法应用生物素和亲和素的ELISA12HRP（用于标记）的RZ值应大于（）3.03.13.23.33.413一个亲和素分子可以结合几个生物素分子（）1个2个3个4个5个14关于ELISA的底物OPD的特点哪一条不正确（）具有致癌性灵敏度高比色方便配成应用液后稳定性好与酶反应后显橙黄色CLASSOVER！*RZ：纯度数，反应酶纯度的。HRPRZ3PH=8.6（350nm）激发，450nm发射光（三）竞争法酶标抗原和待检抗原对固相特异性抗体具有相同的结合力，二者竞争结合固相特异性抗体。免疫反应后，结合于固相的酶标抗原量与标本中待检抗原含量呈反比。待检抗原量越多，酶标抗原与固相抗体结合越少，底物显色反应越浅；反之则显色越深，即底物显色与待检标本中抗原含量呈反比。1．原理（+）EE（-）EEEEEEEE竞争法测抗原竞争法检测抗原的要求酶标抗原和待测抗原具有相同结合抗体的能力；固相抗体和酶标抗原的量是恒定的，酶标抗原和待测抗原的分子数量要高于抗体的结合位点数量。（+）EE（-）EEEEEEE竞争法检测抗体-乙肝核心抗体（HBcAb）（四）捕获法检测抗体将抗人IgM抗体吸附于固相载体上，待检标本中的IgM类抗体多被固相抗体捕获。加入特异抗原与固相抗体捕获的IgM类抗体结合，再加入抗原特异的酶标抗体，形成固相抗人IgM-IgM-抗原-酶标抗体复合物。最后根据加底物后的显色程度确定待检IgM抗体的含量。1．原理EEEEEE（+）（-）捕获法采用固相捕获法检测IgM类抗体时要注意的是RF（IgM类）及其它非特异IgM的干扰。RF（IgM类）能与固相抗人μ链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体（动物IgG）反应，从而导致假阳性反应。3．注意事项第四节酶联免疫斑点试验酶联免疫斑点试验ELISPOT是从单细胞水平检测分泌抗体细胞或分泌细胞因子细胞的检测技术结合了细胞培养技术和ELISA技术。主要用于细胞因子分泌细胞的定量测定。一、基本原理在96孔微孔板板孔底部覆盖PVDF膜，并包被特异性单克隆抗体；在微孔内加入待测细胞和抗原刺激物进行培养；抗体捕获细胞受抗原刺激后分泌的细胞因子；移除细胞、洗涤后，加入生物素标记抗体、酶标链霉亲和素，加入底物，在PVDF膜上显色；检测细胞频率。即用抗体捕获培养细胞所分泌的细胞因子，并以酶联免疫斑点显色方式将其表现出来。二、数据处理及结果报告ELISPOT检测的最终数据是细胞频率，即在