- 1、本文档共12页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
本文档如对你有帮助,请帮忙下载支持!
质粒DNA的小量提取及DNA琼脂糖凝胶电泳
一、前言
质粒
质粒是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够
自主复制的较小的DNA分子(即细胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分
的质粒虽然都是环状构型,它存在于许多细菌以及酵母菌等生物(多
为原核生物)中,乃至于植物的线粒体等胞器中。然而,1984年,
在Streptomycescoelicoler(天蓝色链霉菌)等放线菌以及在
Borreliahermsii(赫氏蜱疏螺旋体)等原核生物中,又相继发现线形质
粒。
天然质粒的DNA长度从数千碱基对至数十万碱基对都有。质粒
天然存在于这生物里面,有时候一个细胞里面可以同时有一种乃至
于数种的质粒同时存在。质粒的套数在细胞里从单一到数千都有可
能。有时有质粒含有某种抗药基因(如大肠杆菌中就有含有抗四环
素基因的质粒)。有一质粒携带的基因则可以赋予细胞额外的生理
代谢能力,乃至于在一细菌中提高它的致病力。一般来说,质粒的
存在与否对宿主细胞生存没有决定性的作用。它是基因工程最常见的
运载体。
质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型和松弛控制
型。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它
也不能复制,通常每个细胞内只含有一个或几个质粒分子,如F因子。
后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷
本文档如对你有帮助,请帮忙下载支持!
贝,一般在20个以上,如ColE1质粒。在使用蛋白质合成抑制剂-
氯霉素时,细胞内蛋白质合成、染色体DNA复制和细胞分裂均受到
抑制,紧密型质粒复制停止,而松弛型质粒继续复制,质粒拷贝数可
由原来20多个扩增至1000-3000个,此时质粒DNA占总DNA的
含量可由原来的2%增加至40-50%。
把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细
胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体。细菌质粒是重组DNA技术中
常用的载体。质粒分子本身是含有复制功能的遗传结构。质粒还带有
某遗传信息,所以会赋予宿主细胞一遗传性状。其自我复制能力
及所携带的遗传信息在重组DNA操作,如扩增、筛选过程中都是极
为有用的。
质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工
构建的。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择
性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性
内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使
分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一多
用途的辅助序列,这用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克
隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴
定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大
致应有下列一特性:⑴分子量小、多拷贝、松弛控制型;⑵具有多种
常用的限制性内切酶的单切点;⑶能插入较大的外源DNA片段;⑷具
有两个以上的遗传标记物,便于鉴定和筛选。⑸对宿主细胞无害。常
本文档如对你有帮助,请帮忙下载支持!
用的质粒载体大小一般在1kb至10kb之间,如PBR322、PUC系
列、PGEM系列和pBlescript(简称pBS)等。
质粒的不兼容性
利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,
当两种质粒同时导入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞的
过程中彼此竞争,在一细胞中,一种质粒占优势,而在另一细胞
中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后,占少数的质粒将会丢失,
因而在细胞后代中只有两种质粒的一种,这种现象称
您可能关注的文档
最近下载
- 冀教版六年级上册英语Lesson 10《How Many Are There》教学课件.pptx
- 雷军英文简历.ppt
- 钢管落地式卸料平台施工方案.doc VIP
- 纳布啡:术后镇痛泵中的高效药物.docx
- 电动垂直起降航空器(eVTOL)起降场 技术要求.docx VIP
- 2023-中国农业大学介绍(完整版).pptx
- 小学残疾儿童送教上门教案(40篇).pdf
- 2024新外研版英语三年级上册 Unit 1 Let's be friends! 自测题(含答案).docx
- 2024年河北省继续医学教育公共必修课参考答案.pdf VIP
- GB/T 10781.8-2021白酒质量要求 第8部分:浓酱兼香型白酒.pdf
文档评论(0)