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越桔组织培养技术规程

1范围

本文件规定了越桔组织培养育苗技术的外植体的采集与处理、接种器具准备、培养基制备、越桔组

织培养程序、炼苗与移栽、出圃标准、生产档案等。

本文件适用于越桔组织培养育苗。

2规范性引用文件

下列文件的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则

LY/T1882林木组织培养育苗技术规程

NY/T1276农药安全使用规范总则

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4外植体的采集与处理

4.1母株的选择

选取生长健壮和无病虫害的越桔作为外植体采集的母株。

4.2外植体采集

4.2.1采集时间

4月～7月份晴天午后或叶片表面露水干后采集外植体。

4.2.2采集方法

剪取生长健壮且无病虫害的当年生嫩枝，去掉叶片并留1mm～2mm叶柄。

4.3外植体的消毒

2

采集的外植体宜当天进行消毒处理，用洗洁精将外植体清洗干净，流水冲洗10min～20min。用75%

酒精对双手及手腕消毒，将预处理后的材料置于已消毒的超净工作台上，剪成带1个或2个芽的茎段置于

已灭菌的烧杯中，先用75%酒精浸泡外植体30s，无菌水清洗3次，每次30s，再用10%次氯酸钠溶液

灭菌10min，无菌水清洗3次，每次30s，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。药剂应符合GB/T8321

和NY/T1276的规定。

5接种器具准备

5.1超净工作台消毒

接种前使用75%酒精将超净工作台的台面及内壁擦拭干净，然后启动超净工作台并开启紫外灯消

毒30min。关闭紫外灯后开启超净工作台风机和照明灯，鼓风10min后方可进行接种工作。

5.2接种工具灭菌

接种剪、枪状镊、接种盘、烧杯等接种工具可提前用高压灭菌锅灭菌，在接种过程中可用置于超净

工作台上的酒精灯或电热消毒器灭菌。灭菌后的接种工具搁置在无菌的接种器皿上,待冷却至室温后方

可使用。

6培养基制备

6.1母液配置

培养基母液配制方法按LY/T1882中4.1规定执行。

6.2培养基配制

培养基配制方法按LY/T1882中4.2.1规定执行。

初代培养基：WPM+ZT2.0mg/L～4.0mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L，pH值5.2～5.4。

继代增殖培养基：WPM+IBA0.1mg/L～0.2mg/L+ZT2.0mg/L～4.0mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L，

pH值5.2～5.4。

生根培养基：1/2WPM+IBA1.5mg/L～2.0mg/L＋NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂7g/L，pH值

5.2～5.4。

6.3培养基灭菌

采用高压蒸汽灭菌，在压力0.105MPa、温度121℃的条件下灭菌20min。灭菌物以不超过灭菌锅

容积的3/4为宜。

6.4培养基保存

灭菌后的培养基放入接种室，应避免阳光直射，在18℃～22℃条件下存放不宜超过7d。

7越桔组织培养程序

7.1初代培养

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7.1.1接种

于超净工作台上将已消毒的外植体茎段垂直插入初代培养基，每个培养瓶接种3个～5个茎段，

均匀分布，接种后将培养瓶瓶口在酒精灯火焰上灼烧1s～2s，迅速盖好瓶盖，在培养瓶瓶壁上标明

品种名称、接种日期、接种人等信息，放入培养室培养。接种35d～45d嫩芽长出后，进行继代增殖培

养。

7.1.2培养条件

白天25℃±2℃，夜间不低于15℃。黑暗培养7d后，转入光照培养。相对空气湿度控制在70%～

80%，光照强度为2000Lux～3000Lux，光照时间为12h～16h/d。

7.2继代增殖培养

7.2.1接种

将培养材料及时转接到新鲜的增殖培养基中，把嫩茎剪成1cm左右的茎段，插入新鲜的增殖培养

基中。污染、玻璃化的增殖苗均应