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显微镜直接计数法

实验报告

篇一：显微镜直接计数法实验报告

显微镜直接计数法

一、实验目的

1、明确血细胞计数板计数原理；

2、掌握使用血细胞计数板进行微生

物计数的方法。二、实验原理

利用血细胞计数板在显微镜下直接

计数，是一种常用的微生物计数方法。

此法的优点是直观、快速。

该计数板（构造如图1所示），是一

块特制的载玻片，其上由四条槽构成三

个平台。中间的平台又被一短横槽隔成

两半，每一边的平台上各刻有一个方格

网，每个方格网共分九个大方格，中间

的大方格即为计数室，微生物的计数就

在计数室中进行。

计数室的刻度一般有两种规格，一

种是一个大方格分成16个中方格，而每

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个中方格又分成25个小方格；另一种是

一个大方格分成25个中方格，而每个中

方格又分成16个小方格。所以无论是哪

种规格的计数板，每一个大方格中的小

方格数都是相同的即共有400个小格。

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每一个大方格边长为1㎜，则每一

大方格的面积为1㎜，盖上盖玻片后，

载玻片与盖

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玻片之间的高度为㎜，所以计数室

的容积为㎜。

其计算方法如下：

设5个中方格中的总菌数为A，菌

液稀释倍数为B1．16×25的计数板计算

公式

细胞数/ml=×16×10000×B=32000AB

个2．25×16的计数板计算公式

细胞数/ml=×25×10000×B=50000AB

个三、实验器材

（1）菌悬液：酵母菌悬液

（2）其他物品：血球计数板，显微

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镜，盖玻片，无菌毛细管等。四、实验

步骤

1．稀释：将酵母菌悬液进行适当稀

释，菌液如不浓，可不必稀释。（一般样

品稀释度要求每小格内约有5—10个菌

体为宜）

2．镜检计数室：在加样前，先对计

数板的计数室进行镜检。若有污物，则

需清洗后才能进行计数。

3．加样品：将清洁干燥的血球计数

板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将

稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴

（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透

作用自行进入计数室，静置5—10分钟

即可计数。

4．显微镜计数：将血球计数板置于

显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数

室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。

若选用25×16规格的计数板则每个

计数室选5个中方格，可选4个角和中

央的中格（即80个小格），若选用16×25

规格的计数板，则数四个角：左上、右

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上、左下、右下的四个中方格，（即100

小格）中的菌体进行计数。做好记录。

5．清洗血球计数板：使用完毕后，

将血球计数板清洗干净，干燥后归还。

五、实验原始过程记录血细胞计数

板规格25×16

实验现象

（1）、在显微镜视野中可以清晰地

看到血细胞计数板的构造，如实验原理

所述一致；同时也观察到有少许污迹；

（2）、在盖玻片边缘滴一小滴菌悬

液后，菌悬液迅速充满计数室，无气饱；

（3）、视野中清晰地看见有密密麻

麻的白色小颗粒（形如鱼卵）、且有部分

细胞正处于出芽生殖阶段，有的明显形

成芽体。

（4）、逐渐稀释后，细胞在一侧变

得十分密集，而另一侧比没稀释前稀疏

许多，能够数出计数室内最小方格内的

细胞数，各中格子中菌数如表1：表1：

各中格中菌数记录与处理表

A表示五个中方格中的总菌数；