化学考研加仪器分析实验课件.pdfVIP

实验目的

▪了解Agilent高效液相色谱仪外标法定量

测定饮料中苯甲酸的操作方法。

实验原理

▪苯甲酸是广泛使用的食品防腐剂之一，我国的食

品添加剂使用卫生标准GB2760-1996中规定，在

碳酸饮料中苯甲酸的最大使用量为0.2g/kg。反

相高效液相色谱可用于各种食品中的苯甲酸分离

检测，当流动相为甲醇：0.02mol/L乙酸铵

（5%：95%）、检测波长230nm时，用标准物

质的保留时间定性，可很快检测出测试溶液中

的苯甲酸，以色谱峰面积的外标法能准确测定

此种物质的含量。在用高效液相色谱法测定碳

酸饮料中苯甲酸时，必须先进行脱气，以避免

将二氧化碳气体引入色谱柱干扰测定。

主要仪器和试剂

▪Agilent高效液相色谱仪，HypersilODS-C18柱

（5μm，4.6×100mm），MWD检测器，50μl

微量注射器。超声波器。

▪甲醇（分析纯）。0.02mol／L乙酸铵溶液。

100μg/mL苯甲酸标准溶液。

样品测试溶液：市售碳酸饮料。

所用溶液均在使用前经滤膜（0.45μm）过滤。

▪色谱条件：25℃；

流动相：甲醇∶0.02mol／L乙酸铵溶液

5∶95；

检测波长：230nm；

流速：1.0ml／min；

进样量：20μL。

实验步骤

▪（1）取市售碳酸饮料约10mL于50mL烧杯

中，超声波脱气30min后，准确吸取1.00ml，

经滤膜（0.45μm）过滤滤入10mL比色管，以

经滤膜（0.45μm）过滤的高纯水定容于5mL

。

▪（2）用100μg/mL苯甲酸标准溶液分别配

制10.0、25.0、50.0μg/mL苯甲酸工作溶液

（水溶液）。

▪（3）开机，打开色谱工作站。

▪（4）打开脱气阀，以5mL/min流速对流动

相进行脱气。

▪（5）脱气完毕后，调节流动相流量为

1.0mL/min，切换脱气阀，打开控制开

关，打开UV检测器开关。按色谱条件设置相

应参数。

▪（6）待基线平衡后，分别用苯甲酸工作溶液

进样20μl，外标法校正曲线。

▪（7）进样20μl样品测试溶液，得到的色谱图

由校正曲线确定样品中苯甲酸的含量。

▪（8）实验结束后，在傍路条件下，先后分别

以水和甲醇冲洗进样口数次。

▪（9）在流动相流量为1.0mL/min的条件下，

先以水色谱柱20min，再以甲醇色

谱柱10min。

▪（10）关闭色谱工作站，关机。

思考题

（1）外标法定量与内标法定量有何差别？

（2）为何要冲洗色谱仪进样口？