标准病理制片流程专家讲座.pptxVIP

;;;;;;;;;;;;谢谢聆听~~;HE染色操作步骤

苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，简称HE染色法，石蜡切片技术里惯用染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内染色质与胞质内核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中成份着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛技术方法。;工具/原料

固定液——甲醛（福尔马林）

脱水剂——酒精

透明剂——二甲苯

石蜡

脱蜡剂：二甲苯

至水剂：酒精

染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染色液

生理盐水、蒸馏水、PBS试验必备溶剂;适用范围

组织学、胚胎学、病理学教学与科研。;he染色试验详细步骤

1取材，固定：固定液——甲醛（福尔马林）

从人或动物新鲜尸体上取下组织块(普通厚度不超出0．5厘米)投入预先配好固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞蛋白质变性凝固，以预防细胞死后自溶或细菌分解，从而保持细胞原来形态结构。;修剪，脱水，透明：脱水剂——酒精

透明剂——二甲苯

不一样组织固定时间不一样，固定成功后需要修剪25px*25px*5px，放入包埋盒中，流水冲洗（去除组织中固定液）30分钟。至于不一样浓度酒精脱水，普通用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐步脱去组织块中水份。再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块中酒精，才能浸蜡包埋。;浸蜡，包埋：石蜡

将已透明组织块置于已溶化石蜡中，放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋，冷却凝固成块即成。包埋好组织块变硬，才能在切片机上切成很薄切片。

切片、展片、烤片：

将包埋好蜡块固定于切片机上，切成薄片，普通为5—8微米厚。切下薄片往往皱折，要放到加热水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。;脱蜡、至水、染色：

脱蜡剂：二甲苯

脱水剂：酒精

染色剂：苏木精水溶液，酒精伊红染;染色液

染色前，须用二甲苯脱去切片中石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最终入蒸馏水，就可染色。

苏木??(Hematoxylin，H)是一个碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色结构含有嗜碱性。伊红(Eosin，E)是一个酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色结构含有嗜酸性。

;HE染色过程：

1

将已入蒸馏水后切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

2

酸水及氨水中分色，各数秒钟。

3

流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

4

入70％和90％酒精中脱水各10分钟。

5

入酒精伊红染色液染色2—3分钟。;脱水、透明：

染色后切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。

封片

将已透明切片滴上树胶，盖上盖玻片封固。待树胶略干后，贴上标笺，切片标本就可使用。