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抗原抗体反应的类型专家讲座

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第三章

免疫原和抗血清制备

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抗原和抗体是免疫学检测两个主要原因；也是整个免疫反应基本条件。

第一节免疫原制备

免疫原是诱导机体产生抗体和致敏淋巴细胞，并能在体内外与抗体或致敏淋巴细胞发生特异性反应物质。

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颗粒性抗原包含人和各种动物细胞抗原以及各种细菌抗原和寄生虫体抗原。血细胞抗原制备比较简单，惯用细胞抗原为绵羊红细胞，采取该细胞制备溶血素，直接取新鲜绵羊红细胞，以无菌生理盐水洗涤3次（每次离心r／min10min），最终配成106／ml浓度细胞悬液，即可应用。细菌抗原多用液体或固体纯培养物，经集菌后处理。

一、颗粒性抗原制备

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细菌鞭毛抗原需用有动力菌株，菌液用0.3％－0.5％甲醛处理，而菌体抗标准需要100℃加温2－2.5h去掉鞭毛抗原后应用。毒素抗标准需要在杀菌后再加0.5％－l％氯化钙溶液。寄生虫和真菌抗原除用破碎法加工粗提外，大多要加以适当纯化。有些细胞膜亦可制成颗粒性抗原。颗粒抗原悬液呈浑浊状或乳浊状，多采取静脉内免疫法，较少加佐剂作皮内注射。

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（一）组织和细胞粗抗原制备

１.组织细胞抗原制备所用组织必须是新鲜或低温保留。器官或组织材料取得后应马上去除表面包膜或结缔组织以及一些大血管。脏器应用生理盐水灌注，去除血管内残留血液及有形成份，再用含0.5ｇ／LNaN3生理盐水洗去血迹及污染物。将洗净组织剪成小块，然后进行粉碎。粉碎方法有两类：①高速组织捣碎机法②研磨法

二、可溶性抗原制备和纯化

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2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原制备

制备抗原细胞包含正常细胞、传代细胞或病理细胞（如肿瘤细胞）。细胞抗原普通分为三个组分：膜蛋白抗原、细胞质抗原（主要为细胞器）和细胞核与核膜抗原。三种抗原制备均需将细胞破碎，其方法有以下几个。

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（1）重复冻融法：将细胞或整块组织置－20℃冰箱内冻结，然后置室温融化，如此重复2次，大部分组织细胞及细胞内颗粒可冻融破碎。

（2）超声破碎法：惯用于处理微生物和组织细胞。

（3）自溶法：利用组织和微生物本身酶系统，在一定pH和温度下，使其细胞裂解。自溶温度，对动物组织细胞常选0－4℃，而对待微生物常选室温（22－25℃）。自溶时常需加入少许防腐剂，如甲苯或氯仿等，因NaN3抑制酶活力，则不宜使用。

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（4）酶处理法：

溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等，在一定条件下能消化细菌和组织细胞。如溶菌酶在碱性条件下，PH8.0可对革兰阳性菌细胞壁溶菌作用，该法适合用于各种微生物。酶破坏细胞含有作用条件温和、内含物成份不易受到破坏、细胞壁损坏程度能够控制等特点。

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（5）表面活性剂处理法：

在适当温度、pH及低离子强度条件下，表面活性剂能与脂蛋白形成微泡，使膜溶解或渗透性改变。惯用表面活性剂有十二烷基硫酸钠（SDS阴离子型）、二乙胺十六烷基溴（阳离子型）、聚山梨酯（非阳离子型）、苯扎溴胺等。该方法惯用于破碎细菌，且作用比较温和。在提取核酸时惯用此方法破碎细胞。

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（二）超速离心分离法

超速离心分离法最惯用于分离亚细胞成份及大分子蛋白质，它是深入纯化第一次过筛。

（三）选择性沉淀法

选择性沉淀法是采取各种沉淀剂或利用一些条件促使抗原成份沉淀方法。

１.核酸去除法

２.盐析沉淀法

（1）抗原粗筛

（2）提取丙种球蛋白

（3）抗原浓缩

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３.有机溶剂沉淀法

４.水溶性非离子型聚合物沉淀法惯用聚合物为聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）及硫酸葡聚糖。水溶性聚合物沉淀蛋白质机制仍不十分清楚，大致机制有以下解释：

①聚合物与蛋白质形成共沉淀物；

②聚合物与蛋白质之间发生水重分配；

③聚合物与蛋白质形成复合物。

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（四）凝胶过滤

凝胶过滤又名分子筛层析，凝胶是含有三维空间多孔网状结构物质，经过处理平衡后，装入层析柱内成为分子筛支撑物。

（五）离子交换层析

离子交换层析是利用一些带电离子基团凝胶或纤维素，吸附交换带有相反电荷蛋白质抗原。

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