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两种不同细胞毒性检测方法的比较

田林奇;韩颖;魏聪;徐玉茵;周静;张娟丽;郭艳

【摘要】目的:通过比较GB/T14233.2-2005和GB/T16886.5-2017中涉及的细胞毒性检测方法-MTT法的差异,为试验的选择提供参考.方法:分别采用GB/T14233.2-2005和GB/T16886.5-2017中的MTT法检测8种医疗器械的细胞毒性,比较两种方法对同一样品的结果判定是否存在差异.结果:由于两个标准在细胞浓度、培养时间、结果判定方面都有所不同,对同一种样品,可能会出现不同的判定结果.

【期刊名称】《中国医疗器械信息》

【年(卷),期】2019(025)001

【总页数】3页(P23-24,39)

【关键词】医疗器械;MTT法;细胞毒性;标准

【作者】田林奇;韩颖;魏聪;徐玉茵;周静;张娟丽;郭艳

【作者单位】河南省医疗器械检验所河南郑州450000;河南省医疗器械检验所河南郑州450000;河南省医疗器械检验所河南郑州450000;河南省医疗器械检验所河南郑州450000;河南省医疗器械检验所河南郑州450000;河南省医疗器械检验所河南郑州450000;河南省医疗器械检验所河南郑州450000

【正文语种】中文

【中图分类】R994

随着现代科学技术的发展，医疗器械在全球范围内发展迅猛，大量新型的医疗器械产品得到了广泛的应用。但同时，因某些产品材质选用不当，或受加工残留剂的影响，对人体带来了一些不容忽视的生物学危害为了保障医疗器械在临床使用的安全有效，临床前的医疗器械生物学评价及评价方法的全球统一化引起了世界各国政府及生物学评价专家的高度重视，为此国际标准化组织于1989年正式成立了ISO/TCl94医疗器械生物学评价技术委员会，并相继制定颁布了ISO10993系列标准。这些标准已逐步为世界各国所认同并相继采纳。对于ISO10993系列标准，我国等同采用为GB/T16886系列标准。

细胞毒性试验是医疗器械生物安全性评价的一个重要检测项目，并以其简便、快捷、灵敏性高、节省动物等优点均被列为首选试验项目，作为评价材料毒性的重要指标[1]。细胞毒性试验是将样品或样品浸提液与细胞共培养一段时间后，通过测定对L-929细胞生长和增殖的影响来评价样品对细胞的潜在毒性作用。目前我国医疗器械细胞毒性检测主要参照GB/T16886.5和GB/T14233.2-2005，而2018年7月1日起新实施的GB/T16886.5-2017中，细胞毒性试验MTT法与GB/T14233.2-2005相比有了较大的变化。

在GB/T16886.5-2003中，只规定了几种评价方式，并没有规定具体的试验方法，而对于输血输注器具而言，一般采用的是GB/T14233.2-2005中的规定的MTT法。但在GB/T16886.5-2017中详细列举了几种细胞毒性检测的方法，具体有MTT法、XTT法、琼脂扩散法等。MTT法因毒性分级清晰，操作简单，灵敏度高，并可估算聚合物的IC50值，表现出了相对优势，所以被经常的使用[2]。但是GB/T16886.5-2017的MTT法与GB/T14233.2-2005相比具有很大的变化，主要表现在细胞浓度，培养时间，检测试剂，评价方法等。由于GB/T14233.2-2005仍然现行有效，且此方法是之前对各类检品一直采用的通用的方法，因此，有必要对GB/T16886.5-2017和GB/T14233.2-2005中所采用的方法进行比较，以便更好的评价医疗器械的细胞毒性[3]。

本试验通过分别采用GB/T14233.2-2005和GB/T16886.5-2017中MTT法对4类8种具有代表性的医疗器械（涉及二类和三类器械）进行细胞毒性检测，以便为生产企业和检测部门进行体外细胞毒性试验的选择提供参考。

1.仪器与试剂

1.1仪器

4131型二氧化碳培养箱（ThermoFisher公司），T-DH型倒置显微镜（Nikon公司），Scepter型细胞计数仪（Millipore公司），VarioskanFlasg型全波长扫描读数仪（ThermoScientific公司）。

1.2试剂

L-929小鼠成纤维细胞株（中国科学院上海细胞所），胎牛血清（厂家：Gibco；批号：1912660C），MEM培养基（厂家：Gibco；批号：1897268），胰酶（厂家：Gibco；批号：1869828），DMSO（厂家：sigma；批号：RNBD8359），异丙醇（厂家：国药集团化学试剂有限公司；批号，MTT（厂家：sigma；批号：MKBN7264V）。

2.试验样品

医疗器械检品分别为不同厂家的麻醉面罩，导尿管，输液器，活检针等检品（本实验采用的检品均为