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酶工程实验报告（论文）

动物肝脏碱性磷酸酶的分离纯化及酶学性质的鉴定

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2023年5月

目录

摘要 1

Abstract 2

1.前言 3

1.1碱性磷酸酶 3

1.2碱性磷酸酶化学特性 3

1.3研究意义 3

2.试剂与仪器 4

2.1试剂 4

2.2仪器 5

3.材料与方法 5

3.1材料 5

3.2方法 5

3.2.1碱性磷酸酶的分离纯化 9

3.2.2碱性磷酸酶的动力学鉴定 13

3.2.3碱性磷酸酶的最适pH及酸碱稳定性测定 13

3.2.4碱性磷酸酶的及热稳定性测定 15

3.2.5克制剂类型鉴别 9

结果 9

结论 13

参考文献 13

致谢 15

动物肝脏碱性磷酸酶的分离纯化及酶学性质的鉴定

摘要目的①通过一系列实验，熟悉并掌握碱性磷酸酶分离纯化的一般环节及相关原理，可以纯熟运用碱性磷酸酶的分离纯化方法得到较为纯净的碱性磷酸酶，②同时对碱性磷酸酶的动力学（Km)、最适PH及酸碱稳定性、最适温度及热稳定性、克制剂类型进行鉴别鉴定。方法：①采用有机溶剂沉淀法从肝匀浆中分离纯化碱性磷酸酶（简称AKP）。②在不同作用物浓度的条件下，测定酶活性（A），求Km值。③将酶液提成若干份，分别置于一系列不同的PH的溶液中保温解决一定期间，然后在最适PH条件下进行活力测定。④一定条件下于不同温度解决酶，迅速降温测定酶活力。⑤以KH2PO4作为碱性磷酸酶的克制剂，验证其克制作用。

关键词：碱性磷酸酶、动力学（Km)、最适PH及酸碱稳定性、最适温度及热稳定性、克制剂、鉴定、米氏常数

Theseparationandpurificationofliveralkalinephosphataseandtheenzymaticpropertiesandidentification

ABSTRACT:Objective(1)throughaseriesofexperiments,familiarwithandmasterthegeneralstepsofisolationandpurificationofalkalinephosphataseandrelatedprinciple,abletoskillfullyusetheseparationandpurificationofalkalinephosphatasemethodisrelativelypurealkalinephosphatase,(2)thedynamicsofalkalinephosphatase(Km),theoptimalPHandacid-basestability,theoptimumtemperatureandthermalstability,thetypesofinhibitorsofappraisal.Methods:(1)usingorganicsolventprecipitationfromliverhomogenateinpurificationofalkalinephosphatase(AKP).(2)undertheconditionofdifferentconcentrationofsubstrate,thedeterminationofenzymeactivity(A),okvalue.(3)theenzymeliquidintoseveralportions,respectivelyinarangeofdifferentPHofthesolutionheatpreservationprocessinginacertaintime,andthenundertheconditionoftheoptimalPHforactivityassay.(4)underacertainconditionindifferenttemperatureprocessingenzymes,rapidcoolingdeterminationofenzymeactivity.(5)withKH2PO4asalkalinephosphataseinhibito