乳酸菌的分离培养.pdf

乳酸菌的分离培养之欧侯瑞魂创作

保加利亚乳杆菌

组长：

组员：

实验目的：1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术及微生物形态观

察；

2.学习微生物制片、染色的基本技术，掌握乳酸菌的简单染色法及无菌操纵接种

技术；

3.通过对培养基的配制，了解配制培养基的一般步调和方法，掌握微生物实验经

常使用的器皿的清洗与包扎、培养基的制备、消毒灭菌。

4.了解各种灭菌的基来源根基理和应用范围，以及实验室中经常使用的灭菌方法。

5.了解酸奶中乳酸菌分离原理，观察乳酸菌的基本形态，掌握用显微镜测微尺丈

量微生物细胞大小、数目的测定的方法。

6.了解稀释平板计数的原理，熟练掌握混合平板培养法。明确显微镜计数的原理

并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。

7.初步学会乳酸菌培养的基本技术，了解并掌握细菌鉴定中经常使用生理生化反

应的原理和方法，掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。

8.了解并掌握微生物菌种收藏的经常使用方法及其优缺点，并了解分歧微生物对

分歧的生物大分子的分解利用情况，认识微生物代谢类型的多样性。

实验原理：乳酸菌指发酵糖类主要产品为乳酸的一类无芽抱、革兰氏染色阳性细菌

的总称，本实验中用革兰氏染色法进行染色，革兰氏染色法是根

据细菌细胞壁成分分歧，脱色效果分歧从而可以将细菌区分为G环日G-菌

通过革兰氏染色以及形态学观察，乳酸菌呈紫色，为革兰氏阳性菌；乳酸菌应为乳

杆菌和乳球菌的混合体。酸奶中含有乳酸菌，而且目前市场上销售的酸奶中通常含

有双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌四种菌。细菌及其它一些

微生物的大小，通经常使用测微计来丈量，测微计分接目测微计与镜台测微计；培

养基是依照微生物生长发育的需要，用分歧组份的营养物质调制而成的营养基质；

灭菌是用物理或化学的方法来杀死或除去物品上或环境中的所有微生物，包含芽抱；

白然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是分歧种类微生物的混合体，

为了研究某种微生物的特性或者要大量培养或者使用某种微生物，必须从这些混

杂的微生物群落中获得纯培养，这些获得纯培养的方法称为微生物的分离和纯化。

用生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产品，从而鉴别细菌的

种属，称之为细菌的生化反应。

实验器材：

样品：含乳酸菌的酸奶

①培养基：改良MR涸体培养基

蛋白腺5g牛肉膏5g酵母提取物柠檬酸二铉1g水500mL

乙酸钠K2HPO41gMnSO44H2O

琼脂MgSO47H2OCaCO35蔺萄糖10g。

仪器用品：500ml烧杯一个100ml量筒一个无菌培养皿12个

250ml容量三角瓶2个5ml无菌移液管1ml无菌移液管6只

15ml试管7只高压灭菌锅天平

水浴锅一个玻棒一根旋涡均匀器一台镜台测微尺

电磁炉一个棉花纱布目镜测微尺

牛皮纸麻绳接种环一个盖玻片

酒精灯一盏牛角匙pH试纸血球计数板

载玻片若干恒温培养箱酸度计擦镜纸、吸水纸

液体石蜡显微镜载玻片玻片架、洗瓶、酒精灯

火柴、滴管

药品：结晶紫，乙醇，草酸铉，碘，碘化钾，番红，KOHNaCl,10%

NaOH2源化铁。

药品配制

结晶紫：结晶紫乙醇饱和液（结晶紫2g溶于20ml95%乙醇中）20ml,1g

草酸铉于蒸馆水100ml。将两液混匀即成。

卢戈氏碘液：碘1g,碘化钾2g,蒸馆水300ml。先将碘化钾溶于少量蒸馆

水中，然后加入碘使之完全溶解，再加入蒸馆水300ml即成。

蕃红溶液：番红，95%^醇100ml,溶解后存于密闭的棕色瓶中。用时取

10ml与80ml蒸馆水混匀即可。

0.1%的吕氏美蓝染液：A液：美蓝，95危醇300ml;B液：0.01%KOH100ml。混

合A和B液即成，按1:100稀释即可。

生理盐水：称取氯化钠，溶解在少量蒸馆水中，稀释到100毫升。

实验步调：

一、培养基的培养

1.称量用天平称取蛋白月东1g,牛肉膏1g,酵