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核蛋白内参
我们知道,内参蛋白是指由管家基因(housekeepinggene)
编码表达的一类蛋白,它们在各组织和细胞中的表达相对恒
定,在实验中检测蛋白的表达水平变化时常用它们来做参照
物。
这些内参蛋白常应用于WesternBlot中,WesternBlot不
仅能证明样品中是否含有某种蛋白,还能比较不同条件、不同
组织和细胞中目的蛋白的相对含量,从而衡量蛋白的表达水
平。内参蛋白作为一种参照物,在其中的作用为确定样本使用
量的一致性,以及校正实验过程中可能出现的操作误差,从而
进一步保证实验结果的准确性。那么对于不同的蛋白,内参蛋
白该如何选择呢?
前两节介绍了几种常见内参蛋白的选择和应用。本节将系统介
绍不同内参蛋白的选择以及云克隆公司现有的内参蛋白抗体。
对于内参蛋白的选择首先是考虑分子量。一般情况下,内参蛋
白和检测的目的蛋白最好相差在5kDa以上。如分子量为
45kDa的检测蛋白,我们可以选择TubulinBeta(54kDa),
LaminB1(66kDa)等,而不选择ACTa2(42kDa)或者beta-
actin(45kDa)。
其次对于不同的组织,应选择不同的内参。如肌动蛋白是一种
细胞骨架蛋白,有六种不同的亚型,包括:alpha-skeletal
muscleactin、alpha-cardiacmuscleactin、alpha-smooth
muscleactin、gamma-smoothmuscleactin、beta-actin
(β-non-muscle)和gamma-non-muscleactin。其中常用作
WesternBlot内参的beta-actin在肌肉和脂肪组织中分布
较少,那么若样本是心肌或脂肪组织来源的,就可以考虑分别
用alpha-cardiacmuscleactin(ACTC1)和GAPDH作为内
参蛋白。
最后,提取蛋白的部位不同,选择的内参蛋白也不同。比如有
时胞质、胞核分开提取而不提取总蛋白时,就要选择相应部位
表达的内参蛋白。如PCNA在细胞核中高效稳定表达,理论上
在细胞质不表达,那么对于胞质提取的蛋白,就不能选用
PCNA作为内参蛋白,而应该选择细胞质中表达的Tublin
Beta、ActinBeta等作为内参蛋白。
云克隆针对不同细胞部位、不同组织、不同分子量的蛋白质
表达推出了一系列内参抗体,以满足用户的不同需求。见表
1。
表1.各种内参蛋白抗体
目标蛋
目标蛋目标蛋白
白的亚
货号1货号2目标蛋白白的分的组织表
细胞定
子量达部位
位
CAB932CAB932甘油醛-3-磷酸脱胞质,胰腺,乳
36kDa
Hu22Hu01氢酶(GAPDH)核,膜腺,胃
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