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核酸与核酸反应
核酸组成:由许多单核苷酸组成多聚物,核苷酸是由碱基、戊糖和磷酸组成;
DNA二级结构、变性与复性:当温度升高,稳定核酸双螺旋次级键断裂,空间结构破坏,变成单链结构过程;当温度回复正常值时,变性核酸互补链重新缔合成为双螺旋结构过程称为复性。
核酸分子杂交:应用核酸分子变性和复性性质,依据两条核酸单链在一定条件下可按碱基互补标准退火形成双链原理,用已知单链核苷酸片段作为探针检测样本中是否存在与其互补同源核酸序列方法;回顾;回顾;生物传感器;内容提要;芯片分析实质是在面积不大基片(玻璃片、硅片、尼龙膜等材料)表面上有序地点阵排列了一系列固定于一定位置可寻址识别分子,反应结果用同位素、荧光法、化学发光法等显示,然后用精密扫描仪或CCD摄像技术统计,经过计算机分析,综合成可读IC总信息。;芯片分析实际上也是传感分析组合,芯片点阵中每一个单元微点都是一个传感探头。传感技术发展精华往往都被应用于生物芯片发展。
阵列检测能够大大提升检测效率,降低工作量,增加可比性。
;芯片分类:依据用途还能够把生物芯片分为两类:信息生物芯片(information-biochip)和功效生物芯片(function-biochip);基因芯片分类:依据探针类型和长度,基因芯片可分为两类。
其中一类是较长DNA探针(100mer)芯片,这类芯片探针往往是PCR产物,经过点样方法将探针固定在芯片上,主要用于RNA表示分析。
另一类是短寡核苷酸探针芯片,其探针长度为25mer左右,普通经过在片(原位)合成方法得到,这类芯片既可用于RNA表示监控,也能够用于核酸序列分析。
;基因芯片:是经过微阵列技术,将高密度DNA片段阵列经过机器或原位合成方式以一定次序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面,以荧光标识DNA探针,借助碱基互补杂交原理,进行大量基因表示及监测等方面研究必威体育精装版革命性技术。
;工作原理:与经典核酸分子杂交方法是一致,都是应用已知核酸序列作为探针与互补靶核苷酸序列杂交,经过随即信号检测进行定性与定量分析,能够在同一时间内平行分析大量基因,进行大信息量筛选与检测分析。
微阵???技术巨大优势在于它能够并行地宏量获取生物信息,借助此技术发展生物芯片则提供了以核酸杂交为基础基因水平表示监控,多态性研究和基因分型(genotyping),从而使我们对基因表示调控有更深入了解。;基因芯片优点
高度并行性:提升试验进程、利于显示图谱快速对照和阅读,在短短几十分钟至数小时内,就能够完成用传统方法需要数月才能完成几万乃至几十万次杂交分析试验。
多样性:可进行样品多方面分析,提升准确性,降低误差。
微型化:降低试剂用量和反应液体积,提升样品浓度和反应速率。
自动化:降低成本,确保质量。
基因芯片缺点
在同一温度下杂交,不一样探针杂交效率不一样;芯片测定过程基本步骤;11.1基本概念;载体:用于连接、吸附或包埋各种生物分子使其以水不溶性状态行使功效固相材料统称为载体
载体表面必须有能够进行化学反应活性基团,方便与生物分子进行偶联
单位载体上结合生物分子到达最正确容量
载体应该是惰性和有足够稳定性,包含机械、物理和化学稳定性
惰性:载体不干扰生物分子功效
稳定性:在压力或酸、碱条件下而不发生改变
载体含有良好生物相容性
通常要有良好光学性质,能适应投射或反射光测量;适合用于制作生物芯片载体材料较少,通常使用玻璃片、金属片和有机高分子膜等
起源方便,表面羟基轻易活化,然后能偶联DNA、酶、抗体、蛋白质、多肽等
大多数生物芯片采取发光检测方法,不论投射光还是反射光都适合;载体活化:经过化学反应用各种不一样活化试剂在载体表面键合上活性基团,方便与配基共价结合,形成含有不一样生物特异性亲和载体,用来固定生物活性分子。;探针设计:怎样选择芯片上探针
确定芯片所要检测目标对象
查询生物分子数据库——取得对应DNA序列数据
序列对比分析——找出特征序列,作为芯片设计参考序列。
数据库有哪些信誉好的足球投注网站——得到关于序列突变信息及其它信息。
cDNA芯片设计关键在于数据库建立和数据库信息利用以及各种文库建立;在进行探针设计和布局时必须考虑:互补性、敏感性和特异性、容错性、可靠性、可控性、可读性
对于DNA序列变异分析,最基本要求是能够检测出发生变异位置,深入要求是能够发觉发生了什么样改变。从杂交单碱基错配区分能力来看,当错配出现在探针中心时,区分能力强,而当错配出现在探针两端时,区分能力非常弱。所以,在设计检测DNA序列变异探针时,检测改变点应该对应于探针中心,以得到最大分辨率。
;11.3基因芯片探针;光刻DNA合成法:由Affymetrix企业开发,采取技术原理是在合成碱基单体5‘羟基末端连上一个光敏保护基。合成第一步是利用光照射使羟基端脱保护,然后一个5’端保护核苷酸单体连接上去,
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