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蛋白质和多肽反相hplc分析和纯化指南
ProteinandpeptidereversephaseHPLCanalysisand
purificationguideline
蛋白质和多肽反相HPLC分析和纯化指南
Introduction:
引言：
Proteinandpeptideanalysisandpurificationareessential
stepsinproteinresearchandthepharmaceuticalindustry.
Reversephasehigh-performanceliquidchromatography(RP-
HPLC)isawidelyusedtechniqueforseparating,analyzing,
andpurifyingproteinsandpeptidesbasedontheir
hydrophobicity.Thisguidelineaimstoprovideanoverview
oftheprinciples,methods,andbestpracticesforRP-HPLC
analysisandpurificationofproteinsandpeptides.
蛋白质和多肽的分析与纯化是蛋白质研究和制药行业中的关键步骤。
反相高效液相色谱（RP-HPLC）是一种基于蛋白质和多肽亲疏水性的
广泛应用技术，用于蛋白质和多肽的分离、分析和纯化。本指南旨
在提供关于RP-HPLC分析与纯化蛋白质和多肽的原理、方法以及最
佳实践的概述。
PrinciplesofRP-HPLC:
RP-HPLC原理：
Reversephasechromatographyinvolvestheseparationof
analytesbasedontheirhydrophobicityusingahydrophobic
stationaryphaseandapolarmobilephase.InRP-HPLC,a
samplecontainingproteinsorpeptidesisinjectedontoa
columnpackedwithahydrophobicstationaryphasesuchas
C18.Thepolarityofthemobilephase,typicallyamixture
ofwaterandanorganicsolvent,isgraduallyincreasedto
elutetheanalytes.Proteinsandpeptideswithhigher
hydrophobicitywillhaveahighertendencytointeractwith
thehydrophobicstationaryphase,resultingindelayed
elution.
反相色谱是利用亲疏水性质将待分析物分离的方法，其中使用了一
个疏水固定相和一个极性流动相。在RP-HPLC中，样品中含有的蛋
白质或多肽被注射到装有亲疏水性固定相（如C18）的柱上。流动
相的极性逐渐增加，通常是水和有机溶剂的混合物，以洗脱待分离
物。具有较高亲疏水性的蛋白质和多肽会更倾向于与疏水固定相发
生作用，导致其洗脱时间延迟。
Samplepreparation:
样品准备：
BeforeperformingRP-HPLCanalysis,itisimportantto
ensurethatthesampleisproperlyprepared.Thisincludes
solubilizingtheproteinorpeptideinanappropriate
buffer,removinganyparticulatesoraggregatesthrough
filtrationorcentrifugation,andoptimizingthesample
concentrationforinjectionontothecolumn.Careshouldbe
takentopreventanydegradationor
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