氨磷汀对免疫性血小板减少性紫癜动物模型小鼠的干预作用.pdf

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氨磷汀对免疫性血小板减少性紫癜动物模型小鼠的干预作用

[摘要]目的探讨氨磷汀对免疫性血小板减少性紫癜(itp)动

物模型小鼠血小板、脾脏系数、骨髓巨噬细胞的影响。方法通过

获取balb/c小鼠血小板抗体,接种到豚鼠身上,获取豚鼠抗小鼠

血小板抗体(aps)。将aps腹腔注射balb/c小鼠建立免疫性血小

板减少性紫癜动物模型,使用氨磷汀腹腔注射进行治疗,观察氨磷

汀对模型小鼠的血小板、脾脏系数、骨髓巨噬细胞的影响。结果氨

磷汀给药后均使itp模型小鼠血小板计数上升、脾脏系数减少、骨

髓成熟巨核细胞增多,与模型组比较差异有统计学意义(p1.3豚

鼠抗血小板抗血清的制备

参考文献的方法[6-7],取健康balb/c小鼠,摘眼球取血,静置

半个小时,800rmp/min离心10min,取上层血清1500rmp/min

离心15min,取上层血清900rmp/min离心10min,取上层血清

3000rmp/min离心10min,弃去血清,得底部沉淀血小板,加入

1%草酸氨1ml,静置5min,3000rmp/min离心10min,弃去上

层液体,底部血小板用生理盐水洗涤3次,用生理盐水稀释到浓度

为1~2×109/l,分别与弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂按1∶1混

合成弗氏完全佐剂血小板抗原混合物与不弗氏完全佐剂血小板抗

原混合物,备用;取健康豚鼠8只,于第1周注射弗氏完全佐剂血

小板抗原混合物于其四肢、腹股沟、背部、皮下,每处注射100μl,

于第2、3、4周注射同剂量的不弗氏完全佐剂血小板抗原混合物。

第4周末用20%乌拉坦2ml腹腔注射麻醉豚鼠,心脏取血。1500

rmp/min离心10min,取上层血清,余下全血继续3000rmp/min

离心10min。合并2次所得血清,得豚鼠抗小鼠血小板血清aps,

-20℃保存,备用。自制直径9cm琼脂糖平板,用打孔器打成梅花

形孔,中间孔滴加血小板悬液(500×109/l),周围孔加1∶2、1∶

4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64不同效价的豚鼠抗小鼠血小板血清。

37℃温箱孵育24h观察沉淀弧,检测抗血清效价。

1.4模型的制备及分组给药[8-9]

取60只雌雄各半的健康balb/c小鼠,随机分为5组,每组12

只,分别为氨磷汀高剂量组、低剂量组、模型组、正常组和阳性对

照组。取出-20℃保存aps,于56℃水浴30min灭活补体,用生理

盐水稀释到1∶4的效价,小鼠进行腹腔注射。于0、2、4、6、8、

10d按照100μg/20g小鼠腹腔注入稀释的抗血清,每2天重复注

射1次,以维持血小板的持续降低。

从第1次注射aps后,以120mg/kg剂量腹腔注射作为高剂量组,

以60mg/kg剂量腹腔注射作为低剂量组,每日1次,连续给药10d,

强的松龙组,以2.25mg/kg剂量腹腔注射作为阳性对照组剂量组,

模型组及空白对照组给予生理盐水。

第10天给药后2h,摘眼球取血,检测血小板计数;解剖取出脾

脏,称重,计算脾脏系数;剥离股骨,取出骨髓涂片,瑞士染色法,

染色,计算巨核细胞的分类数。

1.5统计学处理

应用spss15.0统计软件进行统计分析,计量资料用()的形式

表示,采用t检验,p[4]范辉,朱宏丽,李素霞,等.氨磷汀治

疗17例特发性血小板减少性紫癜[j].中国实验血液学杂志,2008,

16(1):192-196.

[5]靳英,李明阳,刘波,等.氨磷汀在治疗特发性血小板减少

性紫癜中的作用[j].医学与哲学,2012,33(

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