第一部分微生物的利用.pptx

第一部分微生物的利用;本专题在模块中地位和作用;试验1大肠杆菌培养和分离;;试验1大肠杆菌培养和分离;试验1大肠杆菌培养和分离;三、试验教学详细技术操作问题;试验1大肠杆菌培养和分离;（二）关键技术原理

——“细菌划线分离法”;试验1大肠杆菌培养和分离;;试验1大肠杆菌培养和分离;试验1大肠杆菌培养和分离;划线分离：

将摇床上培养12h三角瓶打开，接种环个别深入到菌液中。然后，在装有固体培养基每个培养皿平板上连续划线。划线后盖好培养皿。;培养：

将培养皿均需倒置摆放到37℃恒温培养箱中培养12～24h，;试验结果：

培养皿LB固体培养基中可看到在划线末端位置出现不连续单个菌落，表明大肠杆菌已被分离。

菌种保留：

在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再划线接种在空白斜面上，37℃培养24h后，4℃冰箱保留。;试验1大肠杆菌培养和分离;详细内容标准;试验2分离以尿素为氮源微生物;试验2分离以尿素为氮源微生物;试验2分离以尿素为氮源微生物;三、试验教学详细技术操作问题;试验2分离以尿素为氮源微生物;（二）试验流程——基础原理;本试验是用琼脂糖代替琼脂作为微生物培养基固化剂，其目标是：尽可能使培养基中只含尿素一个含氮化合物，以预防琼脂中含氮化合物被以尿素为氮源细菌利用，有利于对这类细菌筛选。

（2）酸碱指示剂

尿素在被脲酶催化分解前是中性，因为尿素在脲酶催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。;酸碱指示剂是用来指示化学反应前后溶液酸碱性改变。本试验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，;试验2分离以尿素为氮源微生物;涂布分离时，需要先将菌液稀释，普通稀释到10-5～10-7之间，然后取0.1mL不一样稀释度菌液，放在培养皿固体培养基上，再用消毒后玻璃刮刀把这些菌液涂布在培养基平面，在适当稀释度下，可培养产生相互分开菌落。通常每个培养皿中有20个以内单菌落为最适当。

将每个菌落分别接种在斜面上扩充培养后，再做功效性试验。;（1）制备空白平板：取2个三角瓶，???别装入已灭菌全营养LB固体培养基和尿素固体培养基，放在超净工作台上，冷却至60℃左右时，在酒精灯旁把上述两种培养基分别倒至2个培养皿中（做两组，共4个空白平板），轻轻摇匀，平放至凝固。;（2）制备细菌悬液：在无菌条件下，在将1g土样加到装有99mL无菌水三角瓶中，振荡10min，即成10－2土壤稀释液，并依次制备出10－3～10－7稀释液。比如，若想制备10-6稀释液，可取0.5mL10-5稀释液。取样时，尽可能只取悬液，倒入有4.5mL无菌水有盖试管中，摇匀，放在试管架上。;（3）涂布法分离细菌：在无菌条件下，分别取0.1mL稀释度为10-4和10-5土壤稀释液（细菌悬液），分别加到装有全营养LB培养基和尿素培养基培养皿（空白平板）中；再将保留在70%酒精中玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将前面已加入土壤稀释液（细菌悬液）均匀涂布到整个平面上。

;;试验2分离以尿素为氮源微生物;观察试验结果

与稀释度为10-5相比，LB培养基中菌落数在10-4处理中，尿素培养基中菌落数在10-4处理中。

在相同稀释度情况下，尿素培养基中菌落数于LB培养基中菌落数，其原

因是：。;试验3观察土壤中能分解纤维素微生物;（一）内容安排

1.尝试微生物选择培养操作技术

2.表达微生物选择培养在筛选菌种中应用;试验3观察土壤中能分解纤维素微生物;;试验3观察土壤中能分解纤维素微生物;(2)选择培养基对微生物选择作用

选择培养基是在培养基中加入某种化学物质，以抑制大家不需要微生物生长，促进大家需要微生物生长。

本试验目标是分离并选择培养土壤中能分泌纤维素酶菌株，纤维素是这类微生物可利用碳源和能源。

因为卷烟纸普通只含纤维素而不含其它物质，所以，只有能分泌纤维素酶并以纤维素为碳源和能源微生物才能生长在卷烟纸上。;(3)用“滤纸瓦解法”测定纤维素酶活性

一定大小滤纸在纤维素酶作用下，滤纸逐步被破坏，以滤纸破坏速度表示酶活性大小，即滤纸破坏速度越快，纤维素酶活性越大。;试验3观察土壤中能分解纤维素微生物;(2)取灭菌后培养皿，1号放入灭菌土壤，2号放入未灭菌土壤。如土壤湿度不够，需加入一些1号三角瓶中灭菌后自来水。

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