筛选过氧化物酶体增殖物的dna芯片的制作方法.pdf

筛选过氧化物酶体增殖物的dna芯片的制作方法

专利名称：筛选过氧化物酶体增殖物的dna芯片的制作方法

技术领域：

本发明涉及筛选过氧化物酶体增殖物的DNA芯片，更具体而

言，涉及一种DNA芯片，其包括一种探针，该探针可与个体

服药过氧化物酶体增殖物后表达的基因特异性杂交，并涉及

包括DNA芯片的用于筛选过氧化物酶体增殖物的试剂盒，制

备该试剂盒地方法，和使用该试剂盒筛选过氧化物酶体增殖

物的方法。

现有技术的描述

众所周知，过氧化物酶体增殖物在体内产生过量的自由基以

诱发异常的细胞反应和活化促进体内甘油三酯分解的

PPARs(过氧化物酶体增殖物激活的受体)。当动物服药过氧

化物酶体增殖物，体内产生过量的自由基，因此过氧化物酶

体在细胞中异常增殖并除去过量产生的自由基。异常增殖的

过氧化物酶体吸收并除去存在于细胞的大多数自由基，而允

许少量自由基保留在细胞中。因此，所述剩余的自由基，即

使它们是在数量上是小的，能够导致细胞异常的氧化。在这

方面，考虑到安全问题，验证一种待给药到动物的化学品是

否可以作为过氧化物酶体增殖物是非常重要的。

直到现在，为验证一种待给药到动物体的化学品是否可以作

为过氧化物酶体增殖物，筛选具有过氧化物酶体增殖活性的

化学品的下列方法已经在本领域中使用，其包含步骤对动物

给药化学品；从动物切除肝以获得用于光学显微镜检查的组

织样品；和用光学显微镜检查该组织并将其大小与原样样品

比较，以验证异常增殖的过氧化物酶体的存在。

然而，常规方法已经显示对于低的过氧化物酶体增殖活性的

化学品具有时间消耗长和分辨率低的缺点。也就是说，从化

学品服药的动物获得组织样品需要超过一天。此外，对于低

过氧化物酶体增殖活性的化学品它不是相关的，产生可能不

导致过度的过氧化物酶体增殖的相对小量的自由基，因此增

殖的过氧化物酶体的大小与原样相比差别不明显。为了克服

所述问题，本领域已经尝试了多种方法，然而还没有得到可

以替换的方法。

在这种条件下，开发筛选具有过氧化物酶体增殖活性的化学

品有着强烈的理由。

发明概述

本发明人致力于建立筛选具有过氧化物酶体增殖活性的方

法，并发现过氧化物酶体增殖物的筛选可以使用包含特异性

与个体服药过氧化物酶体增殖物时表达的基因杂交的探针

的DNA芯片，和使用包含荧光标记的核苷酸以标记从分离自

样品的RNA合成的cDNA的用于筛选过氧化物酶体增殖物的

试剂盒。

因此本发明的第一个目的是提供筛选过氧化物酶体增殖物

的DNA芯片，包含可以特异性与个体服药过氧化物酶体增殖

物时表达的基因杂交的探针。

本发明的第二个目的是提供制备该DNA芯片的方法。

本发明的第三个目的是提供筛选过氧化物酶体增殖物的试

剂盒，其包含DNA芯片。

本发明的第四个目的是提供使用筛选试剂盒筛选过氧化物

酶体增殖物的方法。

发明详述

本发明筛选过氧化物酶体增殖物的DNA芯片包括由121bp到

587bp核苷酸组成的探针，该探针特异性结合到被过氧化物

酶体增殖物诱导表达的基因；由寡聚(dT)15，(CH2)6-和胺

基以相继次序组成的接头，寡聚(dT)15的3′末端可以结合

到探针的5′末端；和表面包被与接头的胺基通过Schiff碱

作用连接的醛基的固体基材。在本发明优选的实施方案中，

探针，不限于此，选自以下SEQIDNos1到12的ESTs。

AA8189105′-ACAAAAAAAAGAAAAAAAAAAAACACTTTTATTTTCCAC

AAGGAAGAGCAATAGGAAAAGTCAAATCATTTCCCACATGGTTTTCTTAAA

ACAGAGCCTACAAGGACATATTCAGCACCAAATAAAAGATTACAACAGCCA

TAGAATATAATCTATAAAGCAAACATTTAATATTGCACTTTGTTTCGCAAA

CATTTTGGATTTTACTTTTCCTAAATGAAAAATTAGGAATTCAAGATAGCT

TGAATACTAGAGCGCAACTGTGACCCTCAGATGTTATGTCAGGAATTGACC

AATATTTAGAATAGTGTAATGCCTCAAAAGAGTAAAGAAATACTTAATGGG

AAAAATAAAACTTTACTTCACCAACTCTTAAAATAATTTTGTCACCAATGC

CAATTATCAGAATATTGGTCATTCTTGCTTAATAAAGTATTTTGTAGAACA

TGGTAGTGAGCGCCCCGAGGCCATGCAC