YYT 0606.13-2008 组织工程医疗产品 第13部分：细胞自动计数法-标准分享网.docxVIP

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中华人民共和国医药行业标准

YY/T0606.13—2008

组织工程医疗产品

第13部分：细胞自动计数法

Tissueengineeredmedicalproduct—Part13:Standardtestmethodforautomatedenumerationofcellsuspensions

2008-04-25发布2009-06-01实施

国家食品药品监督管理局发布

I

YY/T0606.13—2008

前言

YY/T0606《组织工程医疗产品》分为：

——第1部分：通用要求；——第3部分：通用分类；

——第4部分：皮肤替代品(物)的术语和分类；——第5部分：基质及支架的性能和测试；

——第6部分：I型胶原蛋白；

——第7部分：壳聚糖；

——第8部分：海藻酸钠；

——第9部分：透明质酸钠；

——第10部分：修复或再生关节软骨的植入物的体内评价；——第11部分：脱钙骨异位骨诱导性组织学评价指南；

——第12部分：细胞、组织、器官的加工处理；——第13部分：细胞自动计数法。

本部分为YY/T0606的第13部分。

本部分由国家食品药品监督管理局提出。

本部分由国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心归口。本部分国家食品药品监督管理局中检所医疗器械质量监督检验中心起草。

YY/T0606.13—2008

组织工程医疗产品

第13部分：细胞自动计数法

1范围

YY/T0606的本部分所述的原理和方法适用于绝大部分类型细胞的自动计数，包括黏附生长细胞

和悬浮生长细胞。

2术语和定义

下列术语和定义适用于YY/T0606的本部分。

2.1

电解液electrolyte

用于悬浮细胞的具有轻微传导性的溶液。

2.2

重合coincidence

一个以上的细胞同时穿过小孔。2.3

原始计数rawcount

未对重合细胞进行校正的细胞计数。

2.4

校正计数correctedcount

对重合细胞进行校正后的计数。

2.5

阀值sizethresholds

在仪器上设定的特定细胞群体的大小临界值，是可调整的界值。在此界值之外的细胞或碎片将被排除在分析之外。

3原理

本部分中细胞自动计数的原理方法是电阻抗，即检测由悬浮在传导性溶液中的细胞通过小孔管上的小孔时产生的电阻抗变化来进行细胞计数(如图1所示)。当细胞悬浮在传导性溶液中时(例如磷酸盐缓冲液),它们是不连续的绝缘体。当细胞悬浮液通过圆柱形的小孔管时，每一次细胞的通过都将改变小孔两侧电极间的阻抗，由此产生的电脉冲可用于细胞计数。细胞在小孔间通过被检测到的区带称为“电感应区”。这种原理方法允许在非常窄的大小分布范围内通过对电脉冲的分析有选择性的计数细胞。脉冲的数目意味着细胞的数量，脉冲的幅度与细胞的体积相关。

2

YY/T0606.13—2008

小孔电流真空管

内部电极

水循环

外部电极

小孔内品

杯

O机管悬浮

O

机管

の

のS3Hd

自1细的自动计数法原理示

4意义和用途

4.1组织工程医的细胞应进行常规分析。包括细胞数质。传统的人工计数方法，如显微镜下用血细胞计数器计数已道会产生[0%～30%的误差，并且费时。基于电阻抗原理上的细胞自动计数具有更高的准确度，更加快速，不只限于分析人体细胞和血液细胞，几乎阿用于所用种类和类型的细胞。

4.2电阻抗原理在2050年代即被发现，目前诈多公司都可以制造基于这一原理的细胞自动计数仪器。细胞自动计数仪：安于消除人工计数时不小操作者带来的蹑差。

5检测限的讨论

5.1重合

当一个以上的细胞同时穿过小时，不是产至两个独立的脉冲，而是产生一个更大的脉冲。结果会

发生细胞计数结果偏少，测量的细胞体积增大。重合发生的频率可看作是细胞浓度在统计学上可预测的函数，因此可通过仪器校正，这称为重合校正。通过降低细胞悬液浓度，可最大程度的降低重合的发生，确保结果的准确(误差不超过5%)。

5.2细胞的尺寸变化

细胞直径变化可达30:1,体积变化可达27000:1,而这仅是反应了选择的小孔管的测量功能。应用这项技术，可以在大约0.6μm~1200μm的范围内测量。低限以下会受到热和电噪声干扰。

5.3小孔管的测量范围

小孔管的测量范围与其直径成比例。在0.02倍直径到0.8倍直径的范围内，小孔管的测量范围与直径成线性相关。但在细胞尺寸大于0.6倍小孔管直径时，小孔管容易堵塞。因此