农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座.pptx

农业微生物学试验农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第1页

试验二培养基制备和灭菌1．本试验目标和要求了解配制培养基原理，并掌握配制培养基普通方法和步骤；了解加压蒸汽灭菌原理，并掌握其详细操作方法。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第2页

试验二培养基制备和灭菌2．试验内容和原理马丁氏培养基配制?手提式高压蒸汽灭菌锅使用生理盐水配制农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第3页

试验二培养基制备和灭菌马丁氏培养基马丁氏培养基是一个用来分离真菌选择性培养基。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第4页

马丁氏培养基配方以下：葡萄糖10g蛋白胨5gKH2PO41gMgSO4·7H2O0．5g琼脂15—20g水-1000mlpH自然此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3.3ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉素液0.3ml。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第5页

试验二培养基制备和灭菌高压蒸汽灭菌是将待灭菌物品放在一个密闭加压灭菌锅内，经过加热，使灭菌锅隔套间水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时因为蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内压力，从而使沸点增高，得到高于100℃温度。造成菌体蛋白质凝固变性而到达灭菌目标。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第6页

试验二培养基制备和灭菌需用仪器和试剂等KH2PO4、MgSO4·7H2O、蛋白胨，葡萄糖、琼脂、孟加拉红、试管、三角瓶、烧杯、量杯、天平、手提式高压蒸汽灭菌锅，牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸等。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第7页

试验二培养基制备和灭菌4．试验步骤培养基配制称量——?溶化——?调pH?——过滤——分装——加塞——包扎——灭菌?——无菌检验?农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第8页

马丁氏培养基配制1．称量和溶化按培养基配方，准确称取各成份，并将各成份依次溶化在少于所需要水量中。待各成份完全溶化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%溶液，在1000ml培养液中加入1%孟加拉红溶液3．3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化。2．分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检验。3．链霉素加入因为链霉素受热轻易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第9页

灭菌操作步骤1．首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量水，使水面与三角搁架相平为宜。2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口纸而透入棉塞。3．加盖，并将盖上排气软管插入内层灭菌桶排气槽内。再以两两对称方式同时旋紧相正确两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第10页

灭菌操作步骤4．加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内温度随蒸汽压力增加而逐步上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本试验用1．05kg/cm2，121．3℃，25分钟灭菌。5．灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。6．将取出灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检验若无杂菌生长，即可待用。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第11页

试验二培养基制备和灭菌生理盐水配制0.85%氯化钠水溶液比如：100ml生理盐水配制：称取0.85克氯化钠，溶解在少许蒸馏水中，定容到100毫升。农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第12页

试验二培养基制备和灭菌1.制备培养基马丁氏培养基400ml/瓶，共3瓶2.制备无菌生理盐水（供稀释平板计数用）9ml/支20支；90ml/瓶，4瓶（加玻璃珠）3.灭菌121℃25min农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第13页

试验二培养基制备和灭菌五、试验汇报1．结果检验培养基灭菌是否彻底。2．思索题什么是选择培养基？它在微生物学工作中有何主要性？农业微生物配套实验培养基的制备和灭菌专家讲座第14页