生物化学基础.ppt

生物化学基础授课对象：理学院应化本科三年级学生授课教师：王诗卉学院单位：生命科学与技术学院

内容回顾——蛋白质的性质蛋白质的分子量两性游离和等电点水化层和双电层蛋白质的溶解度

蛋白质的分离提纯分离原理：利用性质差异，放大性质差异特殊性：活性收率：α=A后/A前条件：温和

蛋白质的分离提纯1．蛋白质分子大小不同2．蛋白质溶解度不同3．蛋白质带电性质4．蛋白质配体特异性

蛋白质的分离提纯1．蛋白质分子大小不同(1)透析（Dialysis）(2)凝胶过滤色谱（GelFiltrationChromatography,GFC）

透析（Dialysis）蛋白质分子不能透过半透膜使蛋白质和其他小分子物质如无机盐、单糖、水等分开。常用的半透膜是玻璃纸、火棉纸和其他合成材料。

血液透析小分子溶出小分子被带出透析机透析液血液加压透析（Dialysis）透析机

蛋白质的分离提纯1．蛋白质分子大小不同(1)透析（dialysis）(2)凝胶过滤色谱（GelFiltrationChromatography,GFC）

凝胶过滤色谱（GFC）凝胶珠是多孔的网状结构：多孔型，交联型

凝胶过滤色谱（GFC）凝胶的分级范围：凝胶分离蛋白质的重要指标

操作示意图

分级范围：10-20nmVt，总体积V0，孔隙体积（颗粒间隙）Vi，内体积（颗粒内部）Vm，凝胶基质体积Vt=V0+Vi+Vm混合物：A，30nm；B，5nmC，12nm；D，18nmA：VA=V0B：VB=V0+ViC：VC=V0+V12-20（通过12-20nm的孔）D：VD=V0+V18-20（通过18-20nm的孔）VAVDVCVB流出顺序A→D→C→B

蛋白质的分离提纯1．蛋白质分子大小不同(1)透析（Dialysis）(2)凝胶过滤色谱（GelFiltrationChromatography,GFC）

蛋白质的分离提纯重点：掌握透析和凝胶过滤色谱分离蛋白质的原理难点：凝胶过滤色谱的分离原理