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人脑型肌酸激酶Lys177位点突变对去折叠与再折叠的影响的开题报告

背景介绍：

人脑型肌酸激酶（CK-BB）是一种在神经细胞中高表达的肌酸激酶，在能量代谢和神经保护中起到重要作用。CK-BB在神经元突触前膜上发挥着合成和再生ATP的作用，同时还能够防止氧化损伤和因缺血引起的神经元死亡。

Lys177是CK-BB的一个位点，已经被证实与这种酶的重钙离子结合相关。研究表明，CK-BB的结构变化与其催化活性密切相关。因此，突变Lys177位点可能会对CK-BB的功能和折叠单元产生影响，但尚不清楚该突变如何影响这种肌酸激酶的折叠和再折叠。

研究目的：

本研究旨在探讨Lys177位点突变对CK-BB的折叠和再折叠的影响，以揭示这种突变与该酶的功能和结构之间的关系，为了更好地理解这种突变的生物学效应提供参考。

研究方法：

本研究将从三个方面进行探究，包括靶点蛋白的制备、折叠和离子结合实验：

（1）制备靶点蛋白：通过PCR法在CK-BB编码序列中引入Lys177突变，使用重组表达技术在大肠杆菌中表达该蛋白。利用Ni-NTA亲和层析柱和基于鸟嘌呤亲和素的单克隆分子杂交柱纯化靶点蛋白。

（2）折叠实验：使用荧光谱法测定不同条件下的蛋白质折叠状态，比较野生型和Lys177突变型CK-BB的折叠耐受性并探讨其折叠机制。

（3）离子结合实验：利用isothermaltitrationcalorimetry（ITC）技术研究CK-BB和钙离子之间的相互作用，并比较野生型与突变型的差异体现。

预期结果：

本研究通过比较CK-BB靶点蛋白的折叠和离子互作关系，预计突变Lys177位点可能会对CK-BB的结构稳定性和催化功能产生影响。这些结果将进一步阐明Lys177突变与神经细胞的能量代谢和保护的关联，从而为进一步理解这种突变的生物学效应和寻求相关治疗策略提供参考。