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第5节DNA的粗提取与鉴定染色体成分蛋白质RNA(少量)DNA提取DNA的基本思路:利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。一、实验原理1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水而破裂,释放出内容物。2.洗涤剂能瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。3.DNA在物质的量浓度为0.14mol/L的氯化钠溶液中的溶解度最低,利用这一原理,可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。4.DNA不溶于酒精溶液,但细胞中的某些物质则可以溶于酒精。5.DNA遇二苯胺(沸水浴)会变成蓝色。二、实验设计1、实验材料的选取选取原则DNA含量丰富材料易得提取简便鸡血细胞鸡血细胞核DNA含量丰富材料易得鸡血细胞极易吸水胀破若是动物细胞,如何获取DNA滤液?为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂?在低浓度的溶液中红细胞会吸水胀破。2、破碎细胞,获取含DNA的滤液若是植物细胞,如何获取DNA滤液?加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于DNA释放;食盐有利于DNA溶解。2、破碎细胞,获取含DNA的滤液滤液中的杂质可能有哪些细胞成分?为什么反复地溶解与析出DNA,能够除去杂质?可能有核蛋白、多糖和RNA等杂质用高浓度的盐溶液能除去高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去在低盐溶液中的杂质。3、去除滤液中的杂质滤液+同体积冷却95%酒精白色丝状物析出:溶解:鉴定:沸水5minDNA+二苯胺蓝色物4、DNA的析出与鉴定将白色丝状物溶于2mol/L的NaCl溶液中5.实验材料
①动物
鸡血细胞液的优点提醒:人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核,也没有DNA,不适于作为DNA提取的材料,但却是提取血红蛋白的理想材料。
鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核,含大量的DNA,既经济又易取②植物:新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。
三、方法与过程制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸钠100mL活鸡鲜血180mL500mL烧杯中,玻棒搅拌,离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液血浆血细胞方法步骤加入物质目的1.制备鸡血细胞液2.提取细胞核物质3.溶解核内的DNA4.析出含DNA的粘稠物5.滤出含DNA的粘稠物柠檬酸钠溶液20m1蒸馏水2mo1/L的NaCl溶液加蒸馏水防止血凝固加速血细胞破裂溶解DNANaCl溶液稀释至0.14mol/L使DNA最大限度地释出使含DNA的黏稠物被留在纱布上方法步骤加入物质目的6.DNA的黏稠物再溶解7.过滤含DNA的NaCl溶液8.提取杂质较少的DNA9.DNA的鉴定2mo1/L的NaCI溶液冷却的95%的酒精二苯胺试剂使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中除去含DNA的滤液中的杂质提取DNA有DNA则出现蓝色鉴定不变蓝——对照组溶液逐渐变蓝丝状物(DNA)实验组图示结果加入物质比较均加入:①4mL二苯胺试剂②2mol/LNaCl溶液5mL鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。自变量你能采用其他方法对DNA进行鉴定吗?取少许丝状物,置玻片中央,加1滴甲基绿溶液,丝状物变成绿色。鉴定所用的试剂是二苯胺或甲基绿。用二苯胺须加热。用甲基绿不用水浴加热。注意事项
①制备鸡血细胞液时,要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠,静置后上层是血清,下层为所需要的血细胞。
②整个实验中加入“两次蒸馏水,三次NaCl溶液,一次酒精”
两次加蒸馏水的目的不同,一是涨破细胞,二是稀释溶液。
酒精最好用95%的冷酒精;
③加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,动作要轻缓且朝一个方向。保证DNA分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。
④鉴定DNA时需沸水浴加热。
⑤二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有毒性的试剂,使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位.
⑥盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器(鸡血细胞破碎后释放的DNA,容易被玻璃容器吸附,造成提取过程中DNA的损失)
DNA的直径约为20×10-10m,实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小?答:DNA分子直径只有2nm。丝状物是多个DNA聚在一起形成的。**
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