(正式版)B-T 40140-2021 葡萄轴枯病菌检疫鉴定方法.docxVIP

ICS65.020.01

CCSB16

中华人民共和国国家标准

GB/T40140—2021

葡萄轴枯病菌检疫鉴定方法

Detectionandidentificationofgrapespike-stalkbrownspot

2021-05-21发布

2021-12-01实施

国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

发布

I

GB/T40140—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。

本文件起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国宁波海关。

本文件主要起草人：吴品珊、段维军、雷荣、徐晗。

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GB/T40140—2021

葡萄轴枯病菌检疫鉴定方法

1范围

本文件规定了葡萄轴枯病菌的分离培养、形态学鉴定、分子生物学鉴定方法。

本文件适用于葡萄上葡萄轴枯病菌的检疫和鉴定。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4葡萄轴枯病菌的分类信息

中文名：葡萄轴枯病菌

英文名：grapespike-stalkbrownspot

病原学名及中文名：Alternariaalternata(Fr.)Keissler,链格孢

异名：Alternariaalternatavar.rosicolaV.G.Rao、Alternariafasciculata(Cooke.Ellis)L.R.Jones.Grout、AlternariarugosaMcAlpine、AlternariatenuisNees、Alternariatenuisf.chalaroidesSacc.、Alternariatenuisf.genuinaUnamuno、Alternariatenuisf.trichosanthisD.Sacc.、Alternariatenuisvar.maliMarchal.é.J.Marchal、MacrosporiumfasciculatumCooke.Ellis、TorulaalternataFr.

分类地位：真菌界Fungi,子囊菌门Ascomycota,座囊菌纲Dothideomycetes,格孢腔菌目Pleospo-

rales,格孢腔菌科Pleosporaceae。

葡萄轴枯病菌的其他信息见附录A。

5方法原理

依据病害症状、分离菌的形态特征和分子生物学特性，根据该真菌DNA保守区的特异性进行常规PCR或实时荧光PCR检测，通过电泳条带大小或扩增曲线的变化，对病菌进行综合检疫鉴定。

6试剂、材料和培养基

6.1试剂和材料

除有特殊说明外，所有试验用试剂均为分析纯或生化试剂。

试剂包括：次氯酸钠溶液(活性氯10%)、琼脂粉、葡萄糖、琼脂糖、无菌双蒸水、CTAB提取缓冲液、Tris饱和酚、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、无水乙醇、RNaseA、液氮、苯酚、氯仿、蛋白酶K、TaqDNA

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GB/T40140—2021

聚合酶、dNTP、TaqManMasterMix、核酸染料、DNA分子质量标准物等。

材料包括：植物基因组提取试剂盒、普通PCR反应试剂盒、TaqMan荧光PCR反应试剂盒、50×

TAE电泳缓冲液。

6.2培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、马铃薯胡萝卜琼脂培养基(PCA),具体配方的信息见附录B。

7仪器和用具

7.1仪器

生物显微镜(放大倍数400倍以上)、体视显微镜、二次纯水仪、光照培养箱、高压灭菌锅、超净工作

台、制冰机、离心机、PCR仪、实时荧光PCR仪、凝胶成像系统、电泳仪、电子天平(感量0.01g)、冰箱。

7.2用具

可调移液器(2.5μL、10pL、20μL、100μL、1000μL),吸头，离心管，Eppendorf管(0.2mL、0.5mL、

1.5mL),塑料研杵，液氮罐。

8检疫鉴定方法

8.1症状检查与病害症状

观察葡萄果穗分枝穗轴部位是否有变褐干枯，果粒是否失水萎蔫，表皮是否有褐斑或霉状物。

病害症状主要在幼穗的分枝穗轴上，初期有褐色水浸状斑点，后向主穗轴扩展形成褐色病斑，穗轴变褐坏死，不久失水干枯，花穗易在分枝处折断，严重时，整