实习二红细胞网织红细胞检测课件.pptVIP

实验诊断实习二红细胞、网织红细胞检测

目的和要求l熟悉正常红细胞和网织红细胞的形态学特点l掌握血红蛋白测定方法、参考值和临床意义l掌握血细胞多参数报告单的正常值及其增减的临床意义

红细胞计数(redbloodcellcount)l红细胞计数是取一定微量血液，经稀释后计算出血液内所含红细胞数目l原理：用等渗稀释液将全血稀释至一定倍数，充入血细胞计数池，在光学显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经换算求出每升血液中的红细胞数量l方法：显微镜计数法

器材及试剂：l取血吸管，一次性定量采血管(20ul)l计数板：是一块厚玻璃制成，板上刻度分为9个大方格面积为Imm。中央大方格用于红细胞计数，被双线等2分成25个中方格，每个中方格又划分为16个小方格。计数板与盖玻片组成计数池，计数池深度为0.1mml显微镜、盖玻片、刺血针、棉花等l小试管、刻度吸管、红细胞稀释液。l其它:75%酒精棉球及干棉球

操作:l取血：l选择耳垂边缘或指端，先用75%酒精棉球消毒局部皮肤。等待干后，用消毒后的刺血针刺入皮肤，深约2毫米。待血液从针孔流出，用于棉花擦去第一滴血l轻轻挤压，使血液流出形成绿豆大小的血滴。操作者用右手平拿取血吸管尖端浸入血滴中，缓缓吸血恰至“10”刻度处为止。然后用干棉花擦净吸管外沾附的血液

l稀释及混匀l先准备一清洁小试管，精确滴入红细胞稀释液1.99毫升，备用l将取好的血液立即挤入上述试管中，并来回吸取小量稀释液数次，以便将残余在吸管中的血液全部洗净l摇动试管，充分混匀。此时血液被稀释200倍

l充池l先将计数板及盖玻片擦干净，并将盖玻片复盖于计数池上面。l用吸管吸取己充分混匀的稀释血液一滴，滴于盖玻片的下方边缘处，稀释血液即充填入计数池中。注意勿发生气泡或使稀释血液流入计数池旁小槽内l静置2－3分钟，待红细胞完全下沉稳定后进行计数

l计数l平放计数板于显微镜台上，先用低倍镜找到计数池的中央大方格。观察红细胞是否均匀，并调整至视野中间。l再转换高倍镜计数。镜下红细胞为圆形或盘形、略带黄色的细胞。如将上侧线和左侧线上的红细胞都计数在内，则不要再将下侧和右侧线上的细胞计入。计数时必须按一定方向和顺序，以免将红细胞重复计数或漏数。l计数5个中方格(即四角的及中央的中方格)由红细胞总共的个数，将其结果乘以10。即得每立方毫米血液中所含红细胞数目，再乘以10。即得每升血液中所含红细胞数目。

l每升血液中红细胞数目=五个中方格内红细胞个数×5(变为0.1u1)×10(变为1u1)×10(变为1L)×200(稀释6倍数)=五个中方格内红细胞个数×1010l清洁仪器：l计数后，将盖玻片及计数板用水冲洗干净，再用绸或细布擦干l吸管先用蒸馏水，继用95%酒精，后用乙醚洗涤干净，保存备用

注意事项l不能在有水肿、炎症、淤血等部位或刺血过浅处采血l所用吸管、试管、滴管及血细胞计数板须干净无水l操作迅速，充池一次完成，不能有气泡l红细胞分布不均，每个中方格之间相差大于20个时要重新充池计数

血红蛋白测定l方法：氰化高铁血红蛋白测定法l原理：l血红蛋白(Hb)被高铁氰化钾[KFe(CN)]氧化为高铁36血红蛋白（Hi），Hi与氰离子结合成氰化高铁血红蛋白（HiCN）lHiCN在540nm有一吸收峰l测定其光密度而得血红蛋白浓度

[试剂与器材]器材：试剂：l分光光度计l试管，试管架l氰化高铁血红蛋白稀释剂高铁氰化钾[K3Fe(CN)6]200mg氰化钾（KCN）50mg无水磷酸二氢钾140mgTritonX-1001.0ml用蒸馏水溶解并稀释至1Ll取血吸管:一次性定量采血管(20ul)l刺血针l蒸馏水l75%酒精及干棉球

l该试剂应呈透明、淡黄色，pH在7.0～7.4之间，以蒸馏水作空白，在540nm比色，读数是0l溶液应放置棕色试剂瓶中，塞紧后保存于冰箱中（但不宜冻结），至少可稳定数月l如发现试剂变绿、浑浊则不能使用l其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止血浆蛋白改变引起的浑浊

[实验步骤]l在试管中准确加入HiCN稀释试剂5.0ml，作为测定管l用血红蛋白吸管准确吸取全血20u1，擦去管端血迹，置于试剂中，冲洗3次，混匀l将混合液放置3分钟以后，倒入光径1cm比色皿，用分光光度计在540nm进行比色l以蒸馏水或HiCN稀释试剂作空白管，校正光密度到0点，读取测定管光密度读数

l计算：血红蛋白（g/L）=测定管光密度×（64458/44000）×251=测定管光密度A×367.7l式中：（1）64458