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人用狂犬病疫苗（地鼠肾细胞）

RenyongKuangquanbingYimiao(DishushenXibao)

RabiesVaccineForHumanUse(PHKCell)

本品系用狂犬病病毒固定毒接种原代地鼠肾细胞，经培养、收获病毒液、灭活病毒、浓

缩、纯化，加入适宜的稳定剂后制成，用于预防狂犬病。

1基本要求

生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合凡例凡例有关要求。

2制造

2.1生产用细胞

生产用细胞为原代地鼠肾细胞或连续传代不超过5代的地鼠肾细胞。

2.1.1细胞管理及检定

应符合应符合生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程规定。

2.1.2细胞制备

选用12~14日龄地鼠，无菌取肾，剪碎，经胰蛋白酶消化，分散细胞，接种培养瓶，用

适宜的培养液进行培养。来源于同一批地鼠、同一容器消化制备的地鼠肾细胞为一个细胞消

化批。源自同一批地鼠、于同一天制备的多个细胞消化批为一个细胞批。

2.2毒种

2.2.1名称

生产用毒种为狂犬病病毒固定毒aG株或其他经地鼠细胞适应的狂犬病病毒固定毒株。

2.2.2种子批的建立

应符合应符合生物制品生产和检定用菌毒种管理规程生物制品生产和检定用菌毒种管理规程规定。

原始种子批为2aG1，主种子批应不超过4aG。毒种在地鼠肾原代细胞和豚鼠脑内交替传

代制备工作种子批，在地鼠肾原代细胞的传代应不超过第6代，即不超过10aG；在豚鼠脑

内传代应不超过第5代，即10aG5。

2.2.3种子批的检定

主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.5项检定。

2.2.3.1鉴别试验

用小鼠脑内中和试验鉴定毒种的特异性。将毒种作10倍系列稀释，取适宜稀释度病毒

液与等量狂犬病病毒特异性免疫血清混合，同时设立正常血清对照组，试验组与对照组的

每个稀释度分别接种11-13g小鼠6只，每只脑内接种0.03ml，观察14天，中和指数应不

低于500。

2.2.3.2病毒滴定

取毒种作10倍系列稀释，每个稀释度脑内接种体重为11-13g小鼠至少6只，每只脑内

接种0.03ml，观察14天，病毒滴度应不低于8.0LgLD50/ml。

2.2.3.3无菌检查

依法检查（附录XIIA），应符合规定。

2.2.3.4支原体检查

依法检查（附录XIIB），应符合规定。

2.2.3.5病毒外源因子检查

依法检查（附录XIIC），应符合规定。

2.2.3.6免疫原性检查

用主种子批毒种制备灭活疫苗，腹腔注射体重为12-14g小鼠，每只0.5ml。7天后重复

接种1次作为试验组，未经免疫小鼠做对照组。第一次免疫后的第14天，试验组和对照组

分别用10倍系列稀释的CVS病毒脑腔攻击，每只0.03ml，每个稀释度10只小鼠。保护指

数应不低于100。

2.2.4毒种保存

冻干毒种应置-60℃以下保存。

2.3原液

2.3.1细胞制备

同2.1.2项。

2.3.2培养液

培养液为含适量灭能新生牛血清的乳蛋白水解物、MEM、199或其他适宜培养液。新生

牛血清的质量应符合规定（附录XIIID）。

2.3.3对照细胞外源因子检查

依法检查（附录XIIC），应符合规定。

2.3.4病毒接种和培养

当细胞培养成致密单层后，毒种按0.01－0.1MOI接种（同一工作种子批应按同一MOI

接种），置适宜温度下培养一定时间后，弃去培养液，用无菌PBS或其他适宜洗液冲洗去除

牛血清，加入适量维持液，置33-35℃继续培养适当时间。

2.3.5病毒收获

经培养适宜时间收获病毒液，即为病毒单次收获液。根据细胞生长情况，可换以维持液

进行多次病毒收获。同一细胞批的同一次病毒收获液经检定合格后可合并为单次病毒收获液；

2．3．6单次病毒收获液检定

按3.1项进行。

2．3．7单次病毒收获液保存

于2-8°C保存不超过30天。

2．3．8病毒灭活