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从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)

从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序

一、目的

本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法，以规范操作程序，保证检测数据的有效性。

二、适用范围：

本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。

三、生物安全要求

标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。

四、试剂及仪器设备

4.1试剂

采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液（SF）、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂（XLD）、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基（YS）、三糖铁（TSI）、动力-吲哚-尿素培养基（MIU）、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管

4.2仪器设备

恒温培养箱、微生物鉴定仪

五、采样方法

5.1标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子，最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子

7.1分别标记一个XLD平板（或YS平板、麦康凯平板）和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤（SBG）（或SF增菌液或沙门志贺培养液）。

7.2用1个无菌拭子取少量标本（不要使拭子粘得太多，尽量从可见血或黏液的部位收集）接种在XLD平板的第一区，接着把拭子放入SBG增菌液。再灭菌接种环在XLD平板的其余区进行划线接种。如果是Cary-Blair运送培养基的粪便拭子，则轻搅混合标本后接种增菌液与平板。

7.3所有培养基均放入36℃±1℃培养，SBG的最佳增菌时间是16～18h（建议每天下午4~5时接种标本，第二天早上8~10时用增菌液划平板）。

7.4观察平板：取培养后的平板，观察有无可疑菌落。

7.4.1XLD平板可疑菌落观察：志贺菌在XLD平板上为粉红或无色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落，直径1-2mm，而大部分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径2-3mm。大多数沙门菌在XLD平板上中心黑色的透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形的菌落。（图2）

7.4.２

7.4.３麦康凯平板可疑菌落观察：志贺菌在麦康凯平板上为无色至浅粉色、半透明、光滑、湿润、边缘整齐或不规则、圆形菌落，直径2-3mm；大多数沙门菌为无色菌落，粉红色，带或不带黑心，伤寒沙门菌为无色菌落；而大部分的大肠杆菌类的菌落为粉红或红色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则，直径3-4mm

7.4.４SBG肉汤增菌：SBG增菌16~18小时后，划线接种XLE平板或沙门显色平板，放入36℃±1℃培养18～24h。

7.4.4建议的初步筛查方案（初步生化特征见表1）：

表１沙门菌、伤寒沙门菌、志贺菌及常见肠道菌的初步生化特征

大部分

沙门菌

伤寒沙门菌

志贺氏菌

大肠杆菌

枸橼酸杆菌

变形杆菌

TSI（斜面）

K（红色）

K（红色）

K（红色）

A（黄色）

A（黄色）

K（红色）

TSI（底面）

A（黄色）

A（黄色）

A（黄色）

A（黄色）

A（黄色）

A（黄色）

TSI（H2S）

+（黑色）

小部分

-

-

+（黑色）

+（黑色）

TSI（产气）

+（气泡）

-

-

+（气泡）

+（气泡）

+（气泡）

MIU（动力）

+（弥漫

生长）

+（弥漫

生长）

-（沿接种线生长）

+（弥漫

生长）

+（弥漫

生长）

+（弥漫

生长）

MIU（吲哚）

-（黄色

圆环）

-（黄色

圆环）

-（黄色

圆环）

+（加试剂变红色）

+（加试剂变红色）

-（黄色

圆环）

MIU（尿素）

-（黄色）

-（黄色）

-（黄色）

-（黄色）

-（黄色）

+（红色）

A：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD分离接种TSI和MIU

B：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌YS分离接种TSI和MIU

C：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD和麦康凯分离接种TSI和MIU

D：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌YS和沙门显色分离接种TSI和MIU

E：粪便（或肛拭子）SBG或SF增菌XLD和沙门显色分离接种TSI和MIU

7.5生化初步鉴定

每个平板挑取3~5个分离较好的单个可疑菌落，分别接种到三糖铁（TSI）和动力-吲哚-尿素培养基（MIU），36℃±1℃培养18～24h。沙门菌和志贺菌的生化特征见表2。

7.6系统生化试验

沙门菌和志贺菌初步鉴定阳性菌经转种营养琼脂单