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从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序(讨论稿)
从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序
一、目的
本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、志贺氏菌检测等致病菌检测的方法,以规范操作程序,保证检测数据的有效性。
二、适用范围:
本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、志贺氏菌的分离、鉴定及保存的梯相关操作。
三、生物安全要求
标本及相应的致病菌操作必须在BSL-2生物安全实验室的生物安全柜中进行。
四、试剂及仪器设备
4.1试剂
采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液(SF)、改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤(SBG)、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼脂(XLD)、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基(YS)、三糖铁(TSI)、动力-吲哚-尿素培养基(MIU)、沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管
4.2仪器设备
恒温培养箱、微生物鉴定仪
五、采样方法
5.1标本应为新鲜的或转移至Cary-Blair运送培养基的粪便或肛拭子,最优标本是转移到Cary-Blair运送培养基的粪便拭子。肛拭子
7.1分别标记一个XLD平板(或YS平板、麦康凯平板)和1管9ml改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤(SBG)(或SF增菌液或沙门志贺培养液)。
7.2用1个无菌拭子取少量标本(不要使拭子粘得太多,尽量从可见血或黏液的部位收集)接种在XLD平板的第一区,接着把拭子放入SBG增菌液。再灭菌接种环在XLD平板的其余区进行划线接种。如果是Cary-Blair运送培养基的粪便拭子,则轻搅混合标本后接种增菌液与平板。
7.3所有培养基均放入36℃±1℃培养,SBG的最佳增菌时间是16~18h(建议每天下午4~5时接种标本,第二天早上8~10时用增菌液划平板)。
7.4观察平板:取培养后的平板,观察有无可疑菌落。
7.4.1XLD平板可疑菌落观察:志贺菌在XLD平板上为粉红或无色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落,直径1-2mm,而大部分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则,直径2-3mm。大多数沙门菌在XLD平板上中心黑色的透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形的菌落。(图2)
7.4.2
7.4.3麦康凯平板可疑菌落观察:志贺菌在麦康凯平板上为无色至浅粉色、半透明、光滑、湿润、边缘整齐或不规则、圆形菌落,直径2-3mm;大多数沙门菌为无色菌落,粉红色,带或不带黑心,伤寒沙门菌为无色菌落;而大部分的大肠杆菌类的菌落为粉红或红色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规则,直径3-4mm
7.4.4SBG肉汤增菌:SBG增菌16~18小时后,划线接种XLE平板或沙门显色平板,放入36℃±1℃培养18~24h。
7.4.4建议的初步筛查方案(初步生化特征见表1):
表1沙门菌、伤寒沙门菌、志贺菌及常见肠道菌的初步生化特征
大部分
沙门菌
伤寒沙门菌
志贺氏菌
大肠杆菌
枸橼酸杆菌
变形杆菌
TSI(斜面)
K(红色)
K(红色)
K(红色)
A(黄色)
A(黄色)
K(红色)
TSI(底面)
A(黄色)
A(黄色)
A(黄色)
A(黄色)
A(黄色)
A(黄色)
TSI(H2S)
+(黑色)
小部分
-
-
+(黑色)
+(黑色)
TSI(产气)
+(气泡)
-
-
+(气泡)
+(气泡)
+(气泡)
MIU(动力)
+(弥漫
生长)
+(弥漫
生长)
-(沿接种线生长)
+(弥漫
生长)
+(弥漫
生长)
+(弥漫
生长)
MIU(吲哚)
-(黄色
圆环)
-(黄色
圆环)
-(黄色
圆环)
+(加试剂变红色)
+(加试剂变红色)
-(黄色
圆环)
MIU(尿素)
-(黄色)
-(黄色)
-(黄色)
-(黄色)
-(黄色)
+(红色)
A:粪便(或肛拭子)SBG或SF增菌XLD分离接种TSI和MIU
B:粪便(或肛拭子)SBG或SF增菌YS分离接种TSI和MIU
C:粪便(或肛拭子)SBG或SF增菌XLD和麦康凯分离接种TSI和MIU
D:粪便(或肛拭子)SBG或SF增菌YS和沙门显色分离接种TSI和MIU
E:粪便(或肛拭子)SBG或SF增菌XLD和沙门显色分离接种TSI和MIU
7.5生化初步鉴定
每个平板挑取3~5个分离较好的单个可疑菌落,分别接种到三糖铁(TSI)和动力-吲哚-尿素培养基(MIU),36℃±1℃培养18~24h。沙门菌和志贺菌的生化特征见表2。
7.6系统生化试验
沙门菌和志贺菌初步鉴定阳性菌经转种营养琼脂单
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