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实验四PCR产物的T载体克隆和转
化演示文稿
在是1\一共有38\于星期一
重组DNA技术操作步骤
在是2\一共有38\于星期一
Ø基本原理
目的基因的获取克隆载体的选择和构建
外源基因与载体的连接DNA导入受体细胞
重组体的筛选克隆基因的表达
在是3\一共有38\于星期一
Ø主要步骤:
①制备目的基因和选择相关载体
②目的基因和有关载体进行连接
③重组的DNA导入受体细胞
④DNA重组体的筛选和鉴定
⑤DNA重组体的扩增、表达和其他研究
在是4\一共有38\于星期一
以
质
粒
为
载
体
的
DNA
克
隆
过
程
在是5\一共有38\于星期一
一、目的基因的获得——分
(一)从基因组文库中获得
(二)从cDNA文库中获得
(三)PCR扩增特定基因
(四)人工合成
在是6\一共有38\于星期一
Ø从基因组DNA文库组织或细胞染色体DNA
获取目的基因
限制性内切酶
基因片断
基因组DNA文库克隆载体
存在于转化细胞内
重组DNA分子
由克隆载体所携带的所
有基因组DNA的集合受体菌
含重组分子的转化菌
在是7\一共有38\于星期一
限制酶切位点真核生物染
cosLRcos色体DNA
限制酶消化限制酶部分消化
除去中间片段
cosLRcos
左臂右臂~20KbDNA片段
外源DNA与载体DNA混合
cosL~20Kb外源DNA片段Rcos
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