异种脱细胞真皮基质对新生血管唱片骑师.pptx

毕业答辩异种脱细胞真皮基质对新生血管的作用的研究1汇报人：达静姝导师：陈武副教授

目录21研究背景2研究目的3实验设计与方法4研究结果5讨论6论文发表情况7致谢南京医科大学七年制答辩

研究背景3牙周成形外科通常是基于美学或生理、病理性原因，用于防止或改正因解剖、发育、创伤或疾病引起的牙龈、牙槽粘膜或骨的缺损的牙周手术。膜龈手术的重点在于软组织的缺损修复，随着人们对美观要求的提高而逐渐受到人们的重视。南京医科大学七年制答辩

研究背景4南京医科大学七年制答辩

研究背景5口腔生物膜是膜龈手术常用的生物材料，能替代自体瓣植入手术区，以达到修复软组织缺损，实现组织再生的目的。口腔生物膜可吸收不可吸收胶原膜聚酯膜异体ADM异种ADM南京医科大学七年制答辩

研究背景6异体/异种组织去表皮、脱细胞Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅶ型胶原、弹性蛋白层粘蛋白硫酸角质素纤维连接素保留细胞外基质和相对完整的基底膜脱细胞真皮基质（acellulardermalmatrix，ADM）南京医科大学七年制答辩

研究背景7基膜面上皮细胞移行平台真皮面内皮细胞、成纤维细胞血管化ADM南京医科大学七年制答辩

研究背景8有关研究表明，ADM膜移植体内2周后，基质内有新生血管形成。而在开放创面，血管化进程在移植后1周已启动。南京医科大学七年制答辩

研究背景9血管生成过程是在血管生成促进因子与血管生成抑制因子的共同调控之下发生的。最有效的促血管生长因子提高缺血皮瓣的成活率南京医科大学七年制答辩

研究背景10血管新生（Angiogenesis）是指源于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉的新的毛细血管性血管的生长。血管内皮基质降解内皮细胞移行内皮细胞增殖内皮细胞管道化分支形成血管环新的基底膜形成管型南京医科大学七年制答辩

研究背景11获得细胞多与动脉生物学相似取材，操作方便脐静脉内皮细胞CD31免疫荧光化学染色南京医科大学七年制答辩

研究背景12国内外大量临床研究表明ADM因其良好的生物相容性和一定的体积可以代替组织瓣用于膜龈手术，起到组织充填和创面覆盖的作用。但是多为异体ADM，关于异种ADM的研究还很少，尤其是关于其在分子水平对周围组织，譬如新生血管的影响的研究。南京医科大学七年制答辩

研究目的13试图比较发现与不同生物膜共同培养的内皮细胞释放VEGF的差别，以及生物膜表面内皮细胞形态的变化，从而发现异种ADM对血管生成的作用，并与其他生物膜作对比。最终为临床选择提供指导意义。南京医科大学七年制答辩

14实验设计和方法采集新鲜脐带酶解分离脐静脉内皮细胞CD31免疫荧光化学鉴定传代培养至第三代移植于生物膜表面Elisa检测VEGF慢病毒GFP转染HUVEC倒置荧光镜下观察共培物，计数管型南京医科大学七年制答辩

脐带来源取自南京市妇幼医院2014.4-7,n=4-5选择标准足月、健康产妇平均年龄27岁采集与转运新鲜离体置于含双抗PBS3h内采集细胞15实验设计和方法南京医科大学七年制答辩

实验设计和方法16A组：B-ADMB组：P-ADMC组：Bio-GideD组：空白南京医科大学七年制答辩

研究结果17HUVEC原代培养5倍率10倍率倒置显微镜下观察，人脐静脉内皮细胞贴壁单层生长，呈短梭状或铺路石样镶嵌排列，细胞为扁平多角形，边界清楚，胞浆丰富。胞核清晰可见，为圆形或椭圆形。南京医科大学七年制答辩

研究结果18HUVEC原代培养10倍率20倍率CD31免疫荧光化学染色，倒置相差荧光显微镜下见细胞膜黄绿色着色，细胞轮廓清楚。南京医科大学七年制答辩

研究结果19GFP慢病毒转染48h72h转染48h后可见明显荧光表达，72h后更加明显。取MOI=10时传代培养持续到21d第10代细胞所发出的荧光仍未见明显减弱。南京医科大学七年制答辩

研究结果20ELISA不同时间各组上清VEGF浓度变化A：B-ADM;B：P-ADM;C：Bio-Gide;D:空白南京医科大学七年制答辩

研究结果21ELISA不同时间各组上清VEGF浓度变化独立样本t检验A：B-ADM;B：P-ADM;C：Bio-Gide;D:空白南京医科大学七年制答辩

研究结果22倒置荧光显微镜南京医科大学七年制答辩

研究结果23内皮细胞成管不同时间各组镜下随机视野管型计数（平均值）个/mm26h12h24h48hA6.6918.9720.9038.17B3.3311.7616.6319.81C1.714.9415.1229.90ABC南京医科大学七年制答辩

讨论24南京医科大学七年制答辩血供蒂部