免疫组化(00002)课件.pptxVIP

;;1.1.1原理

目的

1.1.3常用方法

;

应用免疫学基本原理—抗原抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂显色(标记物有酶,荧光素等).来确定组织细胞内抗原，对其进行定位，定性，定量的研究.;

目的

;免疫组化常用方法

;;器材：

微波炉、高压锅、微量加样器、修复盒、湿盒、染色架、

免疫组化笔、防脱载玻片、盖玻片、脱水机、切片机、

石蜡包埋机、摊片机、烤片机、冰箱、电磁炉、

计时器、微型漩涡震荡仪。;1.2器材

;

;

1.PBS：0.01M磷酸盐缓冲液（PH=7.4)

2.抗原修复液：0.01M柠檬酸盐（枸橼酸盐）缓冲液（PH=6.0)

3.固定液：10%中性缓冲福尔马林：（甲醛1份+0.01M

PH7.4的PBS9份配制而成)，4%多聚甲醛等。

4.防脱剂：0.5%多聚赖氨酸。

5.包埋剂：石蜡。

6.一抗、免疫组化检测试剂盒。

7.TO生物透明剂、梯度酒精、3%H2O2、中性树胶。

8.显色剂：苏木素染液、DAB试剂等

;;染

色;石蜡切片;;１.4.3常用免疫组化染色方法;19;SP法

;（12）DAB显色,可在显微镜下观察染色程度；

（13）常水洗净；

（14）擦干后苏木素染色数分钟；

（15）流水冲洗；

（16）盐酸酒精分化，流水冲洗10分钟；

（17）脱水、透明、封片。;22;EnVision法;(１０)DAB显色,可在显微镜下观察染色程度；

(１１)常水洗净；

(１２)擦干后苏木素染色数分钟；

(１３)流水冲洗；

(１４)盐酸酒精分化，流水冲洗10分钟；

(１５)脱水、透明、封片。;石蜡人乳腺导管癌ER染色，胞核阳性，SP法，DAB染色;石蜡，人甲状腺癌CD44V6染色，胞膜阳性，SP法，DAB染色;抗GBM肾小球肾炎，IgG呈细线状

毛细血管壁沉积，＋＋＋＋（荧光×400）;;29;1.5.2染色中的常见问题及对策

;1.5.3.1脱片的可能原因与对策

;;;;用于鉴别肿瘤的组织来源；

细胞受体检测；

病毒性抗原检测；

癌基因、抑癌基因蛋白与生长因子检测；

重新认识某些肿瘤的组织发生、发病机制；