DB22T 2527-2016 转基因玉米中cry1A 基因定性检测PCR法.docxVIP

ICS65.020.20B05

备案号：54204-2017DB22

吉林省地方标准

DB22/T2527—2016

转基因玉米中cry1A基因定性检测PCR法

Qualitativedetectionforcry1Agenesingeneticallymodifiedmaize—PCRmethod

2016-12-09发布2017-03-01实施

吉林省质量技术监督局发布

I

DB22/T2527—2016

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由吉林省农业委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林省农业科学院。

本标准主要起草人：李飞武、邵改革、夏蔚、闫伟、董立明、李葱葱。

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DB22/T2527—2016

转基因玉米中cry1A基因定性检测PCR法

1范围

本标准规定了转基因玉米中cry1A基因定性检测PCR法的术语和定义、原理、试剂或材料、试验条件、仪器设备、样品、试验步骤、结果分析与表述、检出限。

本标准适用于转基因玉米MON810、MON89034、Bt11、Bt176、Bt506、C0030.3.5、双抗12-5转化体及其衍生品种的植株、籽粒及以玉米为唯一原料的玉米初加工品中的cry1A基因的普通PCR定性检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T672转基因植物及其产品检测通用要求

农业部1485号公告—4—2010转基因植物及其产品成分检测DNA提取和纯化

农业部1861号公告—3—2012转基因植物及其产品成分检测玉米内标准基因定性PCR方法农业部2031号公告—19—2013转基因植物及其产品成分检测抽样

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

zSSIIb基因zSSIIbgene

编码玉米淀粉合酶异构体zSTSII-2的基因，在本标准中作为玉米的内标准基因。3.2

cry1A基因cry1Agene

编码苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis）Cry1A杀虫晶体蛋白的一类基因。

4原理

根据转基因玉米中cry1A基因保守序列设计特异性引物，对试样进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期330bp的DNA片段，判断样品中是否含有cry1A基因成分。

5试验条件

常温条件下。

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DB22/T2527—2016

6试剂或材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的一级水。

6.1琼脂糖。

6.210g/L溴化乙锭（EB）溶液：称取1.0g溴化乙锭，溶解于100mL水中，避光保存。

警告——溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废液。注：可选择其他的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。

6.310mol/L氢氧化钠（NaOH）溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加水定容到200mL。

6.4500mmol/L乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液（pH8.0）：称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加入70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液（6.3）直至EDTA-Na2完全溶解，用氢氧化钠溶液（6.3）调pH至8.0，加水定容至100mL。在103.4kPa（121℃)条件下灭菌20min。

6.51mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCl）溶液（pH8.0）：称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解于800mL水中，用盐酸调pH至8.0，加水定容至1000mL。在103.4kPa（121℃)条件下灭菌20min。

6.6TE缓冲液（pH8.0）：分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液（6.5）和2mL乙二胺四乙酸二钠溶液（6.4），加水定容至1000mL。在103.4