GB_T 40252-2021 美澳型核果褐腐病菌活性检测方法.docxVIP

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中华人民共和国国家标准

GB/T40252—2021

美澳型核果褐腐病菌活性检测方法

ViabilitytestofMoniliniafruticola(G.Winter)Honey

2021-05-21发布2021-12-01实施

国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会

发布

GB/T40252—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。

本文件起草单位：中华人民共和国深圳海关、深圳市检验检疫科学研究院、深圳市仙湖植物园。本文件主要起草人：章桂明、王颖、高瑞芳、程颖慧、朱子钦、李娜、黄河清、刘莹。

GB/T40252—2021

美澳型核果褐腐病菌活性检测方法

1范围

本文件描述了应用普通荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对美澳型核果褐腐病菌[Monilin-iafruticola(G.Winter)Honey]进行活性检测的方法。

本文件适用于美澳型核果褐腐病菌相关寄主中携带美澳型核果褐腐病菌的分生孢子活性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

SN/T2589植物病原真菌检测规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

活性viability

具有生命力的一种性质。

3.2

分生孢子活性conidialviabliity

分生孢子具有生命力的一种性质。

注：分生孢子具有活性，说明分生孢子是活的；分生孢子不具有活性，说明分生孢子是死的。

4基本信息

中文名：美澳型核果褐腐病菌

英文名：pathogenofAmericanbrownrotofstonefruit

学名：Moniliniafructicola(G.Winter)Honey

曾用名：Sclerotiniafructicola(Winter)Rehm.

无性态：MoniliafructicolaBatra

分类地位：属真菌界(Fungi),子囊菌门(Ascomycota)子囊菌纲(Ascomycetes),柔膜菌目(Helotia-les),核盘菌科(Sclerotiniaceae),链核盘菌属(Monilinia)。

美澳型核果褐腐病菌寄主、症状、菌落特征及分生孢子形态学特征见附录A。

5原理

分别应用二乙酸荧光素(FlouresceinDiacetate,FDA)和碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)荧光染料

2

GB/T40252—2021

对美澳型核果褐腐病菌孢子进行染色处理，根据FDA可通过细胞代谢留在活细胞内，使具有活性的孢子发出绿色荧光，如果细胞膜损伤，则荧光素流失，因而使不具有活性的孢子不发出荧光；PI能够穿透正在死亡或者已经死亡的细胞膜，使不具活性的孢子发出红色荧光，PI不能透过具有活力的细胞膜，使具有活性的孢子不发出荧光。根据上述特点并运用普通荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对病菌分生孢子进行活性检测，分析分生孢子的死活。

6仪器和试剂

6.1仪器用具

普通荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜、超净级工作台、天平、高压灭菌锅、生化培养箱、冰箱、离心机。

6.2试剂

二乙酸荧光素(FlouresceinDiacetate,FDA):称取0.1gFDA粉末，加入10mL丙酮，配制成浓度为10mg·mL-1的母液，置于棕色瓶4℃避光保存。使用前用丙酮稀释，配置成0.5mg·mL-1的工作液。

碘化丙啶(PropidiumIodide,PI):称取0.01gPI粉末，加入10mL无菌水，配制成浓度为1mg·mL-的母液，置于棕色瓶4℃避光保存，使用前用无菌水稀释，配置成0.05mg·mL-1的工作液。

6.3主要培养基

马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):200g去皮马铃薯切成小方块，加入1000mL自来水，煮沸

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