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离体无性繁殖的一般操作流程

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1.外植体的选择与消毒：

选择健康、无病虫害的植物组织或器官作为外植体，如茎尖、叶片、茎

段、根段等。

将外植体在流水下冲洗干净，去除表面的污垢和杂质。

用70%乙醇消毒外植体表面30秒至1分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。

再用0.1%氯化汞溶液或其他消毒剂对外植体进行消毒，消毒时间根据消

毒剂的种类和浓度而定，一般为5-15分钟。

消毒后，用无菌水冲洗外植体3-5次，以去除残留的消毒剂。

2.培养基的制备：

根据外植体的类型和培养目的，选择合适的培养基配方。

培养基通常包括无机营养成分（如氮、磷、钾、钙、镁等）、有机营养

成分（如蔗糖、维生素、氨基酸等）、植物生长调节剂（如生长素、细胞分裂

素等）和琼脂等。

将培养基的各种成分按照配方准确称量，溶解在适量的蒸馏水中，并用

玻璃棒搅拌均匀。

调整培养基的pH值至5.8-6.0左右，然后用0.1mol/L的氢氧化钠或盐

酸溶液进行微调。

将培养基加热至沸腾，使琼脂完全溶解，然后分装到培养容器中，如培

养皿、三角瓶等。

培养基的分装量一般为培养容器的1/3-1/2左右，分装后用封口膜或棉

塞封口。

3.接种与培养：

在无菌操作台上，将消毒后的外植体接种到培养基上。

接种时，用镊子或接种针将外植体轻轻插入培养基中，注意不要损伤外

植体。

接种后，将培养容器放置在培养箱中进行培养。

培养条件包括温度、光照、湿度等，不同的植物种类和培养阶段对培养

条件的要求不同。一般来说，培养温度为25-28℃，光照强度为1000-2000lx，

光照时间为12-16小时/天，湿度为70%-80%左右。

4.继代培养：

当外植体在培养基上生长一段时间后，需要进行继代培养。

继代培养的目的是扩大培养规模，保持外植体的生长状态和分化能力。

继代培养的方法是将外植体从原来的培养基上转移到新的培养基上，一

般每隔2-4周进行一次继代培养。

继代培养时，需要注意选择生长良好、无病虫害的外植体进行转移。

5.生根培养：

当外植体生长到一定阶段后，需要进行生根培养。

生根培养的目的是诱导外植体形成根系，以便于移栽和成活。

生根培养的方