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基因工程复习

1、1972年，第一个实现DNA重组的人－Berg（体外）

基因工程的诞生：1973年，CohenGroup第一次实现了细菌遗传性状的转移老师讲课混乱，总之，乱七八糟我也不懂，神烦

遗传学诞生1900年（孟德尔——遗传学之父）：分离定律、自由组合定律；染色体平衡学说

分子生物学1953年（沃森、克里克——DNA双螺旋结构）：DNA是遗传物质（复制、表达、遗传密码）

克隆：不需要经生殖细胞受精过程，产生与亲代完全相同的无限后代。分子克隆是在分子水平操作，按人类的意愿，在体外对DNA分子进行重组，再将重组分子导入受体细胞，使其在细胞中扩增和繁殖，以获得该DNA分子的大量拷贝的技术

重组DNA技术(DNArecombinationtechnique):是用酶学的方法将不同来源的DNA在体外切割，连接组成一个杂合的DNA分子的技术

基因工程：在分子水平上进行遗传操作，指将一种或多种生物体（供体）的基因或基因组提取出来，或者人工合成的基因，按照人们的愿望进行严密的设计，经过体外加工重组，转移到另一种生物体（受体）细胞内，使之能在受体细胞遗传并获得新的遗传性状的技术

基因工程：①DNA重组；②DNA体外诱变；③体外基因操作；④基因化学合成等。

基因工程三大要素：供体、受体、载体

基因工程的基本特点：分子水平操作，细胞水平表达基因工程三大工具：限制酶、连接酶、载体

基因工程诞生的理论基础（为什么能进行基因工程）理论上的三大发现：证实了dna是遗传物质

揭示了dna分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定

技术上的三大发明：限制性核酸内切酶的发现与dna的切割

Dna连接酶的发现与dna片段的连接

逆转录酶打破了遗传学（生物学）中心法则，使真核基因的制备成为可能（ppt）\基因工程载体的研究与应用（课本）

怎样进行基因工程？

——3大步骤（DNA体外重组，重组DNA导入宿主细胞后扩增和表达，基因工程后处理）

7.基因：具有遗传效应的dna片段（某些病毒、细菌以rna为遗传物质），可以产生或影响某种表型，可以由于突变生成等位基因变异体

限制酶:是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列并由此切割dna双链结构的限制性核酸内切酶，切断的双链dna都具有5’磷酸基和3’羟基末端

【基因工程说到的限制酶是Ⅱ型酶，具有此类酶的微生物限制－修饰系统分别由限制酶和甲基化酶来完成。Ⅱ型酶分子量小，仅需Mg2＋作为催化反应的辅因子，识别与切割位点相同，产生特异的DNA片段】

命名（1973年Smith原则、Ⅱ型酶）

#根据分离此酶微生物的学名，一般取3个字母

①第一个字母大写——该微生物属名前的第一个字母（课本说明斜体老师ppt未指明）

②第二、三个字母小写——该微生物种名前的2个字母（课本说明斜体老师ppt未指明）

③第四个字母大写有变种或品系的第一个字母

④罗马字母Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ表示从一种微生物中发现了几种限制酶，按发现顺序排列

10.Ⅱ型限制性核酸内切酶的识别序列的特点

①一般为4－6bp的双链dna片段，特异性强

②双重旋转对称的回文结构，即180°旋转对称 GAATTC

CTTAAG

③识别简并序列，是指序列中有核苷酸位可以是不同的核苷酸【GTYRAC Y=C或T，R=G或A，YR=CG或

CA或TG或TA】

④识别位点与切割位点不同，但二者距离是一定的(某些酶识别位点在切割位点附近)远距离裂解酶Distantcleavage：先识别（搞清楚）滑行一段距离再切11.Ⅱ型限制酶的切口类型

①形成平头末端 －TC↓GA—

－AG↓CT—

②形成5′－粘性末端 5′-G AATTC-3′

3′-CTTAA G-5′

③形成3′－粘性末端 3′-G AATTC-5′

5′-CTTAA G-3′

【粘性末端（stickyend）】限制酶切割产生2个突出的末端，放在一起可自发形成双链限制性内切酶切割方法

完全酶切，是指使用的内切酶在目标片段上的切点全部切开，切出来的片段大小不会因为酶量增加，或酶切时间加长而发生改变

部分酶切是指只对片段上一部分酶切位点产生切割。这种一般是在建库，或者需要酶切基因组后，获得一

定大小范围内的片段而使用的酶切方法

单酶切法：一种限制酶酶切，产生n或n+1片段

双酶切法：两种限制酶酶切一种DNA分子，应用于定向克隆，DNA分子限制性酶切图谱12标准酶解体系的建立

一个单位的限制性核酸内切酶定义为：在合适的温度和缓冲液中，在50微升反应体系中