圆二色谱原理与应用课件.pptVIP

圆二色谱CircularDichroism(CD)

原理与应用;光的性质：波粒二象性诞生;粒子性：光是某种粒子即光量子，具有粒子的性质

如反射，散射等现象。

;光源发射光量子;而真实光源向外发射的是连续的光量子如图所示:图中不同颜色的小球代表不同的光量子

所有光量子在一个平面上我们称之为平面偏振光

它的轨迹方程为x＝Acos（ωt＋φ）

公式中A为振幅与光强度的平方成正比

φ为初始相位

t为时间;我们平时看到的光为自然光具有:

1.方向随机性自然光源向外发射方向性是随机的光量子

2.不连续性会产生无数初始相位不同的光量子;两束光的合成:;x;;下面我们研究以下两束圆偏振光的合成:;圆二色性;平面不对称的分子具有各向异性如氨基酸核酸、手性分子

也对偏振光有调节活性;当两束圆偏振光照射到含有这类分子的溶液时:;当溶液中的样品的结构不同,或成分不同我们可以得到不同的椭圆

反过来我们可以通过检测两束旋转方向相反的圆偏振光透过样品

所产生的椭圆的不同来判断样品所含的成分,和结构信息。;泰勒一阶展开式;tan(i0)＝n2/n1时i0被称为布鲁斯特角此时的反射光为平面偏振光，利用该原

理可制造起偏器。;圆二色谱仪器刨面图M为镜子,p为起偏器

ls代表等和水晶;CD特点;CD谱在蛋白质研究中的应用;Thepeptidebondisinherentlyasymmetricisalwaysopticallyactive;图为一些蛋白的(或肽)的标准园二谱图;我们以肌红蛋白为例;当我们得到一个图谱可以通过下表来和前面提到的标准图谱来判断我们

样品的结构信息;对于螺旋性较高的蛋白可以通过下式初步估算螺旋的含量:

但是准确性较差不推荐;——chymotrypsin(allb)

——lysozyme(a+b)

——triosephosphateisomerase(a/b)

——myoglobin(alla);CD谱的分析算法很多但是最主要的都是基于最小二乘法:;RecommendedMethods;TheProteinCircularDichroismDataBank(PCDDB)

http://pcddb.cryst.bbk.ac.uk/;;;;???CD谱分析准确性;ApplicationsofCDinstructuralbiology;CD实验要点;仪器操作及参数:;Nitrogenflushing;温度:圆二信号同紫外和荧光一样对温度十分敏感

实验平行体系温度要保持一致

房间空调,同时仪器控温;;HTplot;Bandwidth(SBW)selection;Numberofdatapoint;Accumulation;扫描速度和响应时间:;样品装备;2.Forstubborndirtorproteins,

a)YoumayuseconcentratedHNO3,aquaregiaorotheracidwash.

b)DoNOTusealkali,hydrofluoricacid,orphosphoricacidonthequartzcell.

Avoidscratchingthecell.

c)CleanwithdistilledH2Othensoakwith2-3%sodiumlaurylsulfateforafewminutes.Rinsethoroughly(10times)withwater,thenEtOH3times,andacetone3times.

3.Aftercleaning,avoidtouchingthesamplecell.Fi