实验五-大肠杆菌与沙门氏菌.pptVIP

**三糖铁琼脂(TSI)成分：蛋白胨20.0g牛肉膏3.0g乳糖10.0g蔗糖10.0g葡萄糖1.0g硫酸亚铁铵(含6个结晶水)0.5g酚红0.025g或5g/L溶液5mL氯化钠5.0g硫代硫酸钠0.5g琼脂12.0g蒸馏水1000mL除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解。将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃10min或115℃15min,灭菌后置成高层斜面,呈桔红色。原理分析：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。实验六细菌生化特性试验扬州大学兽医学院*实验原理各种细菌在其新陈代谢中,由于利用营养物质的能力有所差异,排泄的代谢产物亦不同,所以利用这点进行生化试验,可达到鉴定细菌种的目的,尤其在鉴定肠道杆菌时,生化试验是极其常用的一种方法。一、目的要求学习常用的生化实验方法；掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。个体为杆状散在或成对G－二、背景知识介绍大肠杆菌中等大小0.4-0.7×2-3μm大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；与广泛的兽医临床病征有关，如:犊牛的肠道感染和水泻；幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；狗的尿道感染；鸡:脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等。个体为杆状散在或成对G－沙门氏菌是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，G－，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。在医学、兽医和公共卫生上均十分重要:绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；人类食物中毒的主要病原之一。伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌除雏沙门和鸡沙门氏菌外,其余各菌具有周生鞭毛。三、实验材料常规接种工具:接种棒、酒精灯等革兰氏染色液、玻片、滴管等菌种:大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（1个/组）大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。培养基:三糖铁斜面（1支/人）生化管:葡、乳、麦、甘、蔗、H2S、尿、枸（1套/人）试剂:吲哚试剂、M.R试剂、V-P试剂等四、实验内容观察大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；记录结果。三糖铁琼脂接种挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；置37℃培养。生化管接种培养糖发酵试验:葡乳麦甘蔗H2S试验；尿素酶试验；枸橼酸盐利用试验。葡乳麦甘蔗H2S尿枸葡乳麦甘蔗H2S尿枸大肠杆菌沙门氏菌大肠杆菌沙门氏菌置37℃培养吲哚试验接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中,置37℃培养3-5d；静置分层后,沿试管壁加入吲哚试剂1mL；上层变为红色者为阳性反应。乙醚混匀分层吲哚试剂阳性阴性吲哚试验原理蛋白质中的色氨酸有些细菌如大肠埃希氏菌吲哚对位二甲基氨基苯甲醛+玫瑰吲哚红色①试剂配方一：对二甲基氨基苯甲醛 1g无水乙醇 95mL浓盐酸 20mL②试剂配方二：对二甲基氨基苯甲醛5g戊醇（或异戊醇）75mL浓盐酸 25mL先用乙醇溶解试剂后加盐酸,避光保存。M.R