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杆状病毒保守基因AcMNPVac53的研究的开题报告

一、选题背景

杆状病毒（Baculovirus）是一类座落于昆虫体内的双链DNA病毒，广泛分布于自然界中，它们可以感染各种昆虫，并在寄主体内进行大量复制和表达，因此常用于昆虫细胞等体系的基因表达及克隆、重组蛋白的生产。其中，豆粉蝶杆状病毒（AcMNPV）是应用最为广泛的杆状病毒，其寄主范围广泛，能感染豆蚕、玉米螟等多种昆虫。因此，对其基因功能的深入了解对于杆状病毒及其在杆状病毒系统中的应用具有重要意义。

Ac53是AcMNPV保守基因之一，该基因在各个杆状病毒中具有高度保守性，其序列长度为396bp。据研究表明，Ac53编码的蛋白具有极度稳定的特性，在杆状病毒的感染过程中发挥着重要作用。但目前对Ac53的功能机理尚不明确，在基因水平上对其进行研究有望为更好地理解其在杆状病毒中的作用提供更多的信息和参考。

二、研究内容和方法

本研究旨在深入研究AcMNPVAc53在豆粉蝶细胞中的表达和功能，并借助现代分子生物学技术对Ac53的功能机理进行初步探讨。

（1）构建表达Ac53的重组质粒

采用polymerasechainreaction（PCR）技术从AcMNPV的基因组DNA中扩增Ac53编码序列，然后将其亚克隆到表达载体pFastBac1中，并进行酶切和连接，得到重组质粒pFastBac1-Ac53。然后将该重组质粒用宿主菌E.coliDH10B处理，得到重组质粒的高效转染子。

（2）构建豆粉蝶细胞中Ac53的稳定表达株

将上述得到的重组质粒转染到豆粉蝶细胞中进行稳定表达的构建。首先，将pFastBac1-Ac53重组质粒用脂质体转染法导入豆粉蝶细胞中。然后，筛选表达Ac53的细胞，并通过Westernblot等方法进行确认。

（3）对Ac53在豆粉蝶细胞中的功能进行初步研究

通过上述步骤获得的表达Ac53的豆粉蝶细胞株，设计引物并利用Real-timePCR技术定量检测该基因在不同生长条件下的表达量；同时，将该表达株与野生型豆粉蝶细胞相比较，分析Ac53在豆粉蝶细胞中的生物学功能、相互作用关系等机理特征。

三、预期成果和意义

（1）成功构建Ac53的表达质粒，并在豆粉蝶细胞中稳定表达，为后续对Ac53的功能研究提供了条件。

（2）初步研究Ac53在豆粉蝶细胞中的表达特征和功能机理，从而对基本的杆状病毒生物学进行探索，同时将对杆状病毒的系统学研究以及杆状病毒在昆虫细胞中的高效重组蛋白表达等领域提供更多科学理论和技术支持。

（3）在Ac53的基础上，进一步挖掘和研究保守基因的功能，有望推进杆状病毒和其他多种昆虫生物学知识的发展，进一步促进昆虫学领域的研究进程。