《NADH氧化酶活力的测定》.pdf

ICS07.080

CCSA40

团体标准

T/CAB

NADH氧化酶活力的测定分光光

度法

DeterminationoftheactivityofNADH

oxidase—Spectrophotometricmethod

（征求意见稿）

20XX-XX-XX发布20XX-XX-XX实施

中国产学研合作促进会发布

T/CAB

目次

前言III

1范围1

2规范性引用文件1

3术语和定义1

4原理1

5试剂1

6仪器设备2

7试样制备和试验步骤2

7.1试样酶液的制备2

7.2测定2

8试验数据处理2

8.1液体样品2

8.2固体样品3

9精密度3

II

T/CAB

NADH氧化酶活力的测定分光光度法

1范围

本文件描述了测定NADH氧化酶活力的分光光度法。

本文件适用于生化试剂、工业酶制剂中NADH氧化酶活力的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期

的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括

所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

NADH氧化酶活力单位NADHoxidaseactivityunit

在30℃、pH7.0的条件下，每分钟氧化1μmolNADH所需的酶量为一个酶活力单位，单

位为U。

4原理

++

NADH氧化酶催化底物NADH的氧化生成NAD，NAD在340nm下无吸收，而NADH

有吸收，其ε=6.22mM-1cm-1，通过监测340nm下吸光度的变化来测定NADH的消耗，

340

计算酶活力。

5试剂

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

5.1还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）：CAS号606-68-8，纯度≥98%。

5.2黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）：CAS号84366-81-4，纯度≥95%。

5.3三羟基甲基氨基甲烷（Tris）-HCl缓冲液：50mmol/L，pH7.0。

1

T/CAB

5.4反应底物溶液：含0.13mmol/LNADH、0.1mmol/LFAD及50mmol/LTris，pH7.0。

使用分析天平准确称取9.2mgNADH和8.3mgFAD溶解在100mL的Tris-HCl缓冲液（5.4）

中，充分混匀，现用现配。

6仪器设备

6.1分析天平：感量为0.001mg。

6.2pH计：精度为0.01。

6.3紫外-可见分光光度计：带有温控比色皿槽，波长精度为1nm，吸光度值精度为0.001。

6.4石英比色皿：1cm。

6.5移液器：10μL、1000μL。

7试样制