饲料中牛、绵羊和山羊源性成分的定性检测 实时荧光PCR法 编制说明.docx

《饲料中牛、绵羊和山羊源性成分的定性检测实时荧光PCR法》

编制说明

（征求意见稿）

目录

一、工作简况 1

1.1任务来源 1

1.2标准制定背景 1

1.2.1标准制定的意义 1

1.2.2国内标准的现状 1

1.3主要工作过程 5

二、标准编制原则和主要技术内容确定的依据 6

2.1标准编制原则 6

2.2主要修订内容 7

2.2.1修改适用范围 7

2.2.2修订检测方法 7

2.3检测方法研究 8

2.3.1化学试剂 8

2.3.2仪器设备 9

2.3.3样品制备 9

2.3.4核酸提取 10

2.3.5实时荧光PCR测试 10

2.3.6内参基因真核生物18SrRNA检测方法建立 11

18SrRNA检测引物和探针的筛选 11

18SrRNA检测阴性对照和空白对照出现扩增的原因分析 14

样品DNA梯度稀释后与空白对照Ct的比较 15

利用数字PCR对梯度稀释的样品DNA进行检测 15

18SrRNAPCR检测的判定标准 17

2.3.7方法特异性测试 17

2.3.8绝对检测限（Absolutelimitofdetection)测试 19

2.3.9相对检测限（Relativelimitofdetection)测试 19

2.3.10方法的稳健性（Robustness）测试 21

2.4方法适用性考察 22

2.5本标准与修订前标准方法的比较 26

2.6不同DNA提取方法对检测结果的影响比较 26

三、试验验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果 27

3.1实验验证 27

3.2特异性和相对检测限的实验验证 29

四、与国内、国际、国外同类标准技术内容的对比情况，或者与测试的国外样品、样

机的有关数据对比情况 29

五、采标情况，以及是否合规引用或采用国际国外标准 32

六、与有关法律、法规的关系 32

七、重大分歧意见的处理经过和依据 32

八、涉及专利的有关说明 32

九、贯彻国家标准的要求，以及组织措施、技术措施、过渡期和实施日期的建议等措施

建议 32

十、其他应当说明的事项 33

参考文献 34

1

一、工作简况

1.1任务来源

根据《国家标准化管理委员会关于下达2023年国家标准复审修订计划的通知》（国标委发【2023】64号），本标准修订项目编号为T-469，项目名称为《饲料中牛、绵羊和山羊源性成分的定性检测实时荧光PCR法》，项目承担单位为上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、新希望六和股份有限公司。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）提出并归口。

1.2标准制定背景

1.2.1标准制定的意义

疯牛病(BSE)是发生在成年牛的一种慢性进行性高致死性神经系统疾病，属人兽共患病。自1985年在英国发现以来，现已波及30多个国家和地区。疯牛病主要通过食物链传播，是由于牛食用了含有朊病毒的肉骨粉饲料所致，禁止含牛羊源性成分饲料的生产，流通，使用，成为预防疯牛病感染，流行的主要手段之一。对饲料中牛羊源性成分的检测具有重要的意义。

1.2.2国内标准的现状

目前，我国动物成分检测标准繁多，主要物种检测方法见表1。表1我国主要动物源性成分检测标准汇总

标准类别

标准号

标准名

国家标准

GB/T20190-2006

饲料中牛羊源性成分的定性检测定性聚合酶链式反应（PCR）法

GB/T21101-2007

动物源性饲料中猪源性成分定性检测方法PCR方法

GB/T21107-2007

动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法PCR方法

GB/T21104-2007

动物源性饲料中反刍动物源性成分(牛,羊,鹿)定性检测PCR方法

GB/T25165-2010

明胶中牛、羊、猪源性成分的定性检测方法实时荧光PCR法

GB/T38164-2019

常见畜禽动物源性成分检测方法实时荧光PCR法

检验检疫行业标准

SN/T2051-2008

食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法

SN/T2978-2011

动物源性产品中鸡源性成分PCR检测方法

SN/T2980-2011

动物产品中牛、山羊和绵羊源性成分三重实时荧光