饲料中牛、绵羊和山羊源性成分的定性检测 实时荧光PCR法 编制说明.pdf

《饲料中牛、绵羊和山羊源性成分的

定性检测实时荧光PCR法》

编制说明

（征求意见稿）

目录

一、工作简况1

1.1任务来源1

1.2标准制定背景1

1.2.1标准制定的意义1

1.2.2国内标准的现状1

1.3主要工作过程5

二、标准编制原则和主要技术内容确定的依据6

2.1标准编制原则6

2.2主要修订内容7

2.2.1修改适用范围7

2.2.2修订检测方法7

2.3检测方法研究8

2.3.1化学试剂8

2.3.2仪器设备9

2.3.3样品制备9

2.3.4核酸提取10

2.3.5实时荧光PCR测试10

2.3.6内参基因真核生物18SrRNA检测方法建立11

2.3.6.118SrRNA检测引物和探针的筛选11

2.3.6.218SrRNA检测阴性对照和空白对照出现扩增的原因分析14

2.3.6.3样品DNA梯度稀释后与空白对照Ct的比较15

2.3.6.4利用数字PCR对梯度稀释的样品DNA进行检测15

2.3.6.518SrRNAPCR检测的判定标准17

2.3.7方法特异性测试17

2.3.8绝对检测限（Absolutelimitofdetection)测试19

2.3.9相对检测限（Relativelimitofdetection)测试19

2.3.10方法的稳健性（Robustness）测试21

2.4方法适用性考察22

2.5本标准与修订前标准方法的比较26

2.6不同DNA提取方法对检测结果的影响比较26

三、试验验证的分析、综述报告，技术经济论证，预期的经济效果27

3.1实验验证27

3.2特异性和相对检测限的实验验证29

四、与国内、国际、国外同类标准技术内容的对比情况，或者与测试的国外样品、样

机的有关数据对比情况29

五、采标情况，以及是否合规引用或采用国际国外标准32

六、与有关法律、法规的关系32

七、重大分歧意见的处理经过和依据32

八、涉及专利的有关说明32

九、贯彻国家标准的要求，以及组织措施、技术措施、过渡期和实施日期的建议等措施

建议32

十、其他应当说明的事项33

参考文献34

一、工作简况

1.1任务来源

根据《国家标准化管理委员会关于下达2023年国家标准复审修订计划的通

202364T-469

知》（国标委发【】号），本标准修订项目编号为，项

目名称为《饲料中牛、绵羊和山羊源性成分的定性检测实时荧光PCR法》，项

目承担单位为上海海关动植物与食品检验检疫技术中心、新希望六和股份有限公

SAC/TC76

司。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会（）提出并归口。

1.2标准制定背景

1.2.1标准制定的意义

疯牛病(BSE)是发生在成年牛的一种慢性进行性高致死性神经系统疾病，属

198530

人兽共患病。自年在英国发现以来，现已波及多个国家和地区。疯牛病

主要通过食物链传播，是由于牛食用了含有朊病毒的肉骨粉饲料所致，禁止含牛

羊源性成分饲料的生产，流通，使用，成为预防疯牛病感染，流行的主要手段之

一。对饲料中牛羊源性成分的检测具有重要的意义。