质粒DNA的提取及其定性定量分析步骤.docVIP

质粒DNA的提取及其定性定量分析步骤

（1）从四个管中分别取菌液1.5ml放入四个EP管中，离心10000rpm,1min,离心完成后将管中的上清液弃去，留有沉淀的EP管。

（2）再取1.5ml的菌液与EP管中，离心10000rpm,1min,弃去上清液，就爱那个留有沉淀的EP管，倒扣在吸水纸上出去液体，将上清液去除干净。

（3）向各管中加入300ul的GET溶液充分混匀（吸打，是液体呈悬浮状），室温放置10分钟，同时将KAc冰浴。

（4）加入400ul,0.2MNaoH(1%SDS)，充分混匀（上下颠倒8次左右），冰浴5分钟。

（5）加300ulKAc（PH4.8）,充分混匀（8次）冰浴5分钟，离心10000rpm,5min,弃去沉淀，将上清液移至新的EP管中。

（6）加500ul（0.6倍）异丙醇，颠倒混匀（吸打），室温放置5分钟，10000rpm,5min,弃去上清，留沉淀。

（7）加300ul无菌水溶解，代溶解后加入7.5M醋酸铵（）混匀，冰浴5分钟，离心12000rpm,5min.弃去沉淀，将上清移至新的EP管中。

（8）加1ml（2倍体积）无水乙醇，在-20℃冰箱，30min以上。4

弃去上清，留沉淀。

（9）加300ul70%乙醇（不许溶解），离心10000rpm,2min,倒掉上清，点离，用微量移液器吸出（0.5-10ul），洗干净后，则将其倒扣于吸水纸上，除去乙醇，室温自然干燥。

（10）利用分光光度计分别测量260nm和280nm处的光度值。