农业部2630号公告-14-2017 转基因植物及其产品成分检测 人溶菌酶基因(hLYZ)定性PCR方法.docxVIP

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中华人民共和国国家标准

农业部2630号公告一14—2017

转基因动物及其产品成分检测

人溶菌酶基因(hLYZ)定性PCR方法

Detectionofgeneticallymodifiedanimalsandderivedproducts—QualitativePCRmethodforHomosapiensLysozyme(hLYZ)

2017-12-25发布2018-06-01实施

中华人民共和国农业部发布

I

农业部2630号公告—14—2017

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中华人民共和国农业部提出。

本标准由农业部科技教育司归口。

本标准起草单位：农业部科技发展中心、华中农业大学、上海杰隆生物工程股份有限公司。本标准主要起草人：刘榜、李文龙、刘静、宋贵文、张庆德、王文君、刘思国。

1

农业部2630号公告—14—2017

转基因动物及其产品成分检测

人溶菌酶基因(hLYZ)定性PCR方法

1范围

本标准规定了人溶菌酶基因(hLYZ)的定性PCR检测方法。

本标准适用于转人溶菌酶基因(hLYZ)的羊、牛及其产品的定性PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。丸是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

农业部2031号公告2013转基因动物及其产品成分检测普通牛(Bosraurus)内标准基因

定性PCR方法

农业部2122号公告2-2014转基因动物及其产品成分检测羊内标准基因定性PCR方法农业部2406号公告7-2016转基因动物及其产品成分检测DNA提取和纯化

3术语和定义

农业部2031题告-14-2013、农业部2122号公告—2-2014界定的以对列术语和定义适用

于本文件。

3.1工

人溶菌酶基因—HomosapiensLysozyme(hLYZ)

编码人N-乙酰胞壁质聚糖水解酶的基因，位于人12号染色体，GenBank,accessionnumber:NG_

008195。

4原理

根据hLYZ基因特异序列设计引物，对试样进行PCR扩增。依据是否文增获得预期220bp的特异性DNA片段，判断试样中是否含有hLYZ基因成分

5试剂和材料

除非另有说明，仅使用分析纯试剂和重蒸馏水或符合GB/T6682规定的二级水。

5.1琼脂糖。

5.210g/L溴化乙锭(EB)溶液：称取1.0g溴化乙锭，溶解于100mL水中，避光保存。警溴化乙锭有致癌作用，配制和使用时应戴一次性手套操作并妥善处理废弃物。

注：根据需要可选择其他效果相当的核酸染料代替溴化乙锭作为核酸电泳的染色剂。

5.310mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液：在160mL水中加入80.0g氢氧化钠，溶解后，冷却至室温，再加水定容到200mL。

5.4500mmol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?)溶液(pH8.0):称取18.6g乙二胺四乙酸二钠，加入70mL水中，缓慢滴加氢氧化钠溶液(5.3)直至EDTA-Na?完全溶解，用氢氧化钠溶液(5.3)调pH至8.0,加水定容至100mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

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农业部2630号公告—14—2017

5.51mol/L三羟甲基氨基甲烷一盐酸(Tris-HCl)溶液(pH8.0):称取121.1g三羟甲基氨基甲烷溶解于800mL水中，用盐酸调pH至8.0,加水定容至1000mL。在103.4kPa(121℃)条件下灭菌20min。

5.6TE缓冲液(pH8.0):分别量取10mL三羟甲基氨基甲烷一盐酸