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富铬酵母中三价铬和六价铬的测定

1范围

本文件规定了富铬酵母中三价铬和六价铬的测定方法。

本文件适用于富铬酵母中三价铬和六价铬的测定。

2规范性引用文件

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文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

GB5009.123-2023食品安全国家标准食品中铬的测定

3原理

试样中六价铬经过铬酸根离子的磷酸氢二钾缓冲溶液提取，离心滤膜后，通过液相色谱仪-紫外检

测器检测将干扰物分离与衍生试剂（二苯氮基脲）混合，利用铬酸根的强氧化性，在酸性环境下氧化二

苯氮基脲并且络合成紫红色的络合物，外标法进行定量。

4试剂和材料

除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1硝酸：GR。

4.1.2硫酸：GR。

4.1.3氨水：AR。

4.1.4甲醇：HPLC级。

4.1.5二苯氮基脲：AR，CAS140-22-7。

4.1.6三水磷酸氢二钾：AR。

4.1.7重铬酸钾：纯度98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

4.2试剂配置

4.2.1磷酸氢二钾缓冲提取液（0.1mol/L）：称取22.822g三水磷酸氢二钾（4.1.6），加水溶解，调

pH至7.9~8.1，定容1L。

2

4.2.2硫酸溶液（2mol/L）：取27.2mL浓硫酸（4.1.2），缓慢加入盛有200mL水的烧杯中，待冷

却后，转移至250mL容量瓶，并定容。

4.2.3硫酸使用溶液（pH1.5）：取900mL水，用2mol/L硫酸溶液（4.2.2）调节pH在1.1~1.5之

间。

4.2.4柱后衍生溶液：称取0.8g二苯氮基脲（4.1.5），用100mL甲醇溶解，加硫酸使用溶液（4.2.3），

定容至1L。

4.2.5六价铬标准储备液（1.0mg/mL）：称取0.2829g重铬酸钾（4.1.7），加水溶解，定容至100mL。

4.2.6六价铬中间液（10mg/L）：吸取1.0mL六价铬储备液（4.2.5）于100mL容量瓶中，用水定容。

4.2.7六价铬中间使用液（100μg/L）：吸取1.0mL六价铬中间储备液（4.2.6）于100mL容量瓶中，

用水定容。

4.2.8六价铬标准系列溶液：分别吸取0mL、0.25mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL六

价铬中间使用液于50mL容量瓶中，用水定容至刻度线，混匀。该标准系列的标准分别为：0μg/L、0.5

μg/L、1.0μg/L、2.0μg/L、4.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L，现用现配。

5仪器与设备

5.1液相色谱仪：带柱后衍生、二极管阵列检测器或紫外可见光检测器。

5.2电子天平：感量0.1mg。

5.3离心机：转速≥10000r/min。

5.4pH计：精度±0.01。

6试验步骤

准确称取1.0g样品于50mL离心管内，加入25mL磷酸氢二钾缓冲提取液，涡旋振荡2min，重

复3次，10000r/min离心5min，取上清液过0.45μm膜，上机分析。同时做空白。

7仪器参考条件

7.1色谱柱：阴离子交换色谱柱，4.6×250mm，5μm或同效果色谱柱。

7.2流动相：准确移取5.0mL硝酸（4.1.1）和7.0mL氨水（4.1.3），加水950mL，pH调节至7.0~7.5

之间，定容至1L，超声脱气。

7.3流动相流速：0.6mL/min。

7.4衍生液流速：0.6mL/min。

7.5衍生箱温度：60℃。

7.6进样量：50μL。

7.7检测波长：540nm。

3

7.8参比波长：350nm。

8定性分析

将六价铬混合标准系列工作液和试样