- 1、本文档共6页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
缺氧诱导因子—1抑制剂细胞筛选模型的建立及抑制剂研究
[摘要]目的:建立并应用2种缺氧诱导因子1(HIF1)抑制剂细胞筛选模
型对雷公藤甲素和三白脂素8活性进行评价,为HIF1靶点抑制剂的研发提供基
础。方法:建立基于报告基因的HIF1抑制剂细胞筛选模型,U251HRE和
T47DHRE细胞模型,分别对雷公藤甲素与三白脂素8活性进行检测,观察其对
下游关键调控基因VEGF表达的影响,并用MTT法比较2类抑制剂对多种实体
瘤细胞的增殖抑制活性。结果:2种细胞模型在1%O2缺氧20h,由HIF1诱
导的荧光素酶高表达,可用于抑制剂的活性评价。雷公藤甲素对U251HRE细胞
模型敏感,其HIF1抑制活性IC50(3.4±0.5)×10-8mol·L-1,而三白脂素8对
T47DHRE细胞模型敏感,其IC50(2.4±0.6)×10-8mol·L-1;雷公藤甲素和
三白脂素8在1×10-7mol·L-1都可对T47D细胞因缺氧所致的VEGF表达升
高产生明显抑制作用,其抑制率分别为85.2%,62.6%;雷公藤甲素对所测肿瘤
细胞株都有明显的增殖抑制活性,而三白脂素8对乳腺癌、胰腺癌细胞株较为敏
感。结论:针对不同类别的HIF1抑制剂建立相应敏感的特异性细胞筛选模型至
关重要。
[关键词]肿瘤;缺氧诱导因子1;三白脂素8;雷公藤甲素;抑制剂;筛
选模型
微环境缺氧是实体瘤发生发展中一个持续存在的重要病理特征之一[1]。缺
氧诱导因子1(hypoxiainduciblefactor1,HIF1)是肿瘤缺氧调控途径中最为
关键的核转录调控因子,与下游调控基因上的缺氧效应元件(HRE)结合后增强
其转录[2]。已知HIF1所调控的下游基因超过70多种,其中大多与肿瘤血管新
生、侵袭转移、放化疗耐受等密切相关[34]。
本文采用报告基因方法,通过建立的2种HIF1抑制剂细胞筛选模型分别对
天然药用植物三白草和雷公藤来源的三白脂素8和雷公藤甲素进行活性检测,并
对其下游关键调控基因VEGF及体外抗肿瘤活性进行初步研究。为HIF1抑制剂
的研发提供线索。
1材料
1.1药物与试剂三白脂素8(manassantinA)与雷公藤甲素(triplotide)分
别由中国医学科学院药物研究所天然药物和合成药物化学研究室提供,
HPLC≥98%;Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司,SteadyGlo荧光素
酶检测系统、DualGlo双荧光素酶检测系统和pRLCMV海肾荧光素酶质粒均购
自美国Promega公司;pGL2TKHRE萤火虫荧光素酶质粒由GiovanniMelillo
教授馈赠(NationalCancerInstituteFrederick,USA);VEGFELISA试剂
盒购于美国RD公司;溴化四氮唑蓝(MTT)购自Sigma公司;其余试剂
均为分析纯。
1.2细胞株及培养RPMI1640和DMEM培养基购自GIBCO,胰蛋白酶
购自Invitrogen公司;PAA胎牛血清购自美国GE公司。人胃癌细胞BGC823、
人乳腺癌MCF7购于中国医学科学院细胞中心;人神经胶质瘤细胞U251和
SHY5Y、人乳腺癌细胞系T47D和MDAMB231、人肝癌细胞HepG2、人结肠腺
癌细胞HT29及人胰腺癌MIAPaCa2,Capan2,SW1990均购于美国ATCC;
U251HRE与U251pGL3细胞系由GiovanniMelillo教授馈赠。上述细胞培养于
含10%胎牛血清的DMEM或RPMI1640。
1.3仪器MCO5M三气培养箱购自日本SANYO公司;ELx800酶标仪购自美
国BioTek公司;GloMax96微
您可能关注的文档
- 甲乙双方合作协议书.pdf
- 人力资源管理课程实训要求.pdf
- 交易网络化带来经济刑法领域新挑战.pdf
- 农业生产机械化.pdf
- 用户体验的界面设计.pdf
- 派遣劳动关系属于什么关系.pdf
- 基于插值模型的海平面上升对岛国人口的影响研究.pdf
- 以色列学校中的性别平等问题述评.pdf
- 碳酸钙产业系列调研报告之一.pdf
- 后疫情时代,旅游拉动女性消费升级.pdf
- 商务英语智慧树知到答案2024年武汉城市职业学院.docx
- 身体的奇迹:人体生理探秘(山东联盟)智慧树知到答案2024年山东第一医科大学.docx
- 无机化学与化学分析(山东联盟)智慧树知到答案2024年山东航空学院.docx
- 游美国,学英语智慧树知到答案2024年山东建筑大学.docx
- 统计学智慧树知到答案2024年湖北工程学院.docx
- Visio商业图表制作分析智慧树知到答案2024年上海商学院.docx
- 高级语言程序设计(c)智慧树知到答案2024年陕西理工大学.docx
- 物理化学智慧树知到答案2024年广东工业大学.docx
- 医用高等数学智慧树知到答案2024年哈尔滨医科大学大庆校区.docx
- 大学基础物理实验智慧树知到答案2024年南开大学.docx
文档评论(0)