GB 5009.299-2024食品中乳铁蛋白的测定.docxVIP

中华人民共和国国家标准

GB5009.299—2024

食品安全国家标准

食品中乳铁蛋白的测定

2024-02-08发布2024-08-08实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局

发布

1

GB5009.299—2024

食品安全国家标准

食品中乳铁蛋白的测定

1范围

本标准规定了食品中乳铁蛋白的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料、调制乳粉及乳基婴幼儿配方食品中牛乳铁蛋白含量的测定。

本标准不适用于风味发酵乳、豆基婴幼儿配方食品中牛乳铁蛋白的测定。

2原理

试样中的牛乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取,肝素亲和柱富集净化后,反相高效液相色谱柱分离,紫外检测器于280nm处检测,外标法定量。

3试剂和材料

除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1乙腈(CH3CN):色谱纯。

3.1.2三氟乙酸(CF3CO2H):色谱纯。

3.1.3氯化钠(NaCl)。

3.1.4磷酸(H3PO4)。

3.1.5磷酸氢二钠(Na2HPO4)。

3.2试剂配制

3.2.1磷酸盐缓冲液Ⅰ:称取7.1g磷酸氢二钠、58.4g氯化钠,加900mL水溶解,用磷酸调pH至8.0±0.2,加水定容至1000mL,临用现配。

3.2.2磷酸盐缓冲液Ⅱ:称取28.4g磷酸氢二钠,加900mL水溶解,用磷酸调pH至7.5±0.2,加水定容至1000mL,临用现配。

3.2.30.1%三氟乙酸溶液:量取1mL三氟乙酸注入900mL水中,用水稀释至1000mL,过0.45μm滤膜。

3.3标准品

牛乳铁蛋白标准品(CAS号:146897-68-9):纯度≥95%,铁含量≤35mg/100g,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。

注:标准品可以使用满足溯源要求的商品化标准溶液。

3.4标准溶液配制

3.4.1牛乳铁蛋白标准储备溶液(5.0mg/mL):称取50mg(精确至0.1mg)牛乳铁蛋白标准品用水溶解,转移至10mL容量瓶并定容至刻度,混匀,0℃~4℃条件下保存,可保存3个月。

3.4.2牛乳铁蛋白标准中间溶液(0.50mg/mL):吸取1.0mL牛乳铁蛋白标准储备溶液,用磷酸盐缓

2

GB5009.299—2024

冲液Ⅰ定容至10mL,临用现配。

3.4.3牛乳铁蛋白标准系列工作溶液:准确移取上述牛乳铁蛋白标准中间溶液,用磷酸盐缓冲液Ⅰ稀释定容,配制成浓度分别为1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL和200.0μg/mL的标准系列工作液,临用现配。

3.5材料

3.5.1肝素亲和柱:1mL,柱容量≥2mg,或性能相当者(验证方法见附录B)。

注:使用不同厂商的肝素亲和柱,在样品提取、上样、淋洗和洗脱的操作方面可能会略有不同,应根据肝素亲和柱特点进行优化。

3.5.2滤膜,水相,0.45μm。

3.5.3水相针头滤器:聚醚砜材质,0.45μm。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱仪:配有紫外检测器或相当者。

4.2天平:感量分别为0.01g和0.1mg。

4.3冷冻离心机:4℃,转速≥10000r/min。

4.4pH计:精度为0.01。

4.5涡旋振荡器。

4.6恒温水浴锅。

4.7固相萃取柱装置。

5分析步骤

5.1样品前处理

5.1.1试样制备

取有代表性的样品至少200g,液态样品摇匀后储存于容器中作为试样,于0℃~4℃保存,备用;固态样品混匀后储存于容器中作为试样,常温下干燥保存,备用。

5.1.2试样提取

5.1.2.1液态试样(巴氏杀菌乳、调制乳、含乳饮料)

称取5g(精确至0.01g)试样于烧杯中,加入适量磷酸盐缓冲液Ⅱ提取,分次将样