免疫组织化学技术--精品医学课件(3).pptVIP

Mouseanti-connexin43（缝隙连接蛋白）primaryantibodieswereappliedfor1h,atroomtemperature.PolyclonalFITC-labeledgoatanti-mouseantibodies.

Finally,nucleiwerecounter-stainedwith1μg/mlHoechst33342（1）直接法——检测抗原抗体补体免疫复合物原理：用荧光素标记的抗补体抗体检查组织切片中与抗原抗体-补体复合物，在荧光显微镜下观察：抗原-抗体-补体复合物-抗补体抗体（荧光）复合物存在的部位。特点：此法识别补体种类，常用于检测肾穿活检的标本。3.免疫荧光补体法补体系统抗原-抗体-补体结合（无特异性）荧光标记的抗补体抗体（C3c或C1q）肾活检标本的检测及诊断IgA、IgM、IgG?：以确定参与免疫反应的球蛋白种类；?C3c、C1q：以证实免疫反应过程中补体激活途径，即经典或旁路途径；HBsAg、HbcAg等：发现肾炎相关性抗原。诊断：系膜增殖性肾炎：肾小球系膜区呈现强弱不等的一种或数种免疫球蛋白或补体沉积；原发性毛血管内增生性肾炎：高强度的IgG和补体C3呈粗颗粒状于毛细血管壁和系膜区沉积；原发性膜性肾病：IgG和补体C3沿肾小球毛细血管壁呈细颗粒状沉积；非典型膜性肾病：IgG、IgA、IgM、C3、C1q、FRA均呈高强度地沉积于系膜区和毛细血管壁，即“满堂亮”。?膜增生肾小球肾炎：IgG条带状沉淀（2）间接法——检查组织内抗原原理：抗原+特异性抗体与补体的混合液+荧光素标记的抗补体抗体荧光显微镜下观察优点：此法可示踪组织细胞内的抗原，只需制备一种荧光素标记的抗补体抗体就可用于检测不同种属来源的第一抗体。3.免疫荧光补体法4.双重免疫荧光染色法原理：用两种荧光素标记的抗体加入同一组织或细胞标本由于采用了两种不同颜色的荧光素分别标记不同的特异性抗体，从而对同一标本中两种不同抗原进行定性、定位及相对含量的检测。如A抗原的抗体用罗达明（RB200）标记，呈桔红色，B抗原的抗体用FITC标记，呈黄绿色。常用方法有：1．一步双染法：2．二步双染法：4.双重免疫荧光染色法1．一步双染法：将两种抗体分别用不同的荧光素标记并混合，直接进行染色反应。2．二步双染法：先用RB200标记的A抗体进行免疫荧光染色，再用FITC标记的B抗体染色。根据两种抗体的动物种属不同，可用直接法也可用间接法。最后荧光显微镜下采用两种不同的激发光分别观察，可见不同抗原的存在部位。mousethymusforMac-2andIL-6(doublestaining)神经干细胞的分化已开始分化神经元，制造出丝状β2微管蛋白（紅色）。Co-stainingofspinalcordsectionsforBDNFwithGFAP(D,green)ortriplestainedwithAPC(E,green;oligodendrocytemarker),GFAP(E,blue),andBDNF(E,red)showedBDNFimmunoreactivityinastrocytesandoligodendrocytes(colocalizationofAPCandBDNFimmunoreactivityisshowninyellow;arrows).DifferentiationofhCNS-SCnsintoastrocytes,neurons,andoligodendrocytesat17weeks.(A)Fewhumancytoplasm-positive(SC121,r